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近年来，随着第三代头孢菌素的大量使用，细菌耐药已成为世界难题。革兰阴性杆菌产生ESBLs是导致该类细菌产生耐药性的重要原因之一<[1]>。值得注意的是，自20世纪90年代CTX-M型ESBLs首次在欧洲报道<[2]>以来，世界许多地区均有报道而且其基因亚型不断增多，至今已有40余种(http：//www．lahey．org/studies/webt．htm)。目前对CTX-M型ESBLs的检测方法还比较有限，本研究首次运用一种全新的方法对CTX-M型超广谱β-内酰胺酶的基因型进行检测，同时，对产CTX-M型ESBLs菌株的耐药性进行监测分析。
本实验分为两部分：
第一部分：运用变性高效液相色谱快速检测CTX-M型超广谱β-内酰胺酶的基因型
目的:运用变性高效液相色谱(denaturing high-performance liquid chromatography，DHPLc)技术对已经确认产超广谱β-内酰胺酶(extended spectrum beta-lactamases，ESBLs)的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌临床分离株CTX-M型质粒进行基因分型，探讨其敏感性和特异性，试图建立一种快速检测CTX-M型超广谱β-内酰胺酶基因型的新方法。
方法:利用PCR技术从50株产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌临床分离株中扩增出CTX-M型质粒的编码序列，扩增产物运用DHPLc技术进行分析和DNA测序确定其基因突变的类型，最后通过比对二者结果后确定其基因型。
结果:50株产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌临床分离株中，有34株扩增到CTX-M型质粒的编码序列共35份(其中1株同时扩增到2份CTX-M型编码序列)。经过DHPLc分析，15份表现为单一洗脱峰，其中有11份与其标准菌株CTX-M-3的相一致；4份与其标准菌株CI-X-M-9的相一致；测序确定它们的碱基序列与各自的标准株亦相一致，不存在变异，分别为CTX-M-3型和CTX-M-9型；20份表现为3种形态各异的异常洗脱峰(双峰和三峰)，其中有17份表现为其中一种异常洗脱峰，有2份为另一种异常洗脱峰，有1份为第3种异常洗脱峰，测序结果表明这20份标本与其标准株对比均存在着基因突变，并且DHPLc中异常峰一致的标本均为同一基因亚型，它们分别为CTX-M-14、CTX-M-19和CTX-M-13。
第二部分：产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性分析
目的:了解产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药情况。
方法:采用针对SHV和TEM基因的特异性引物进行PCR扩增确定β-内酰胺酶基因型；运用改良三维实验法检测菌株产AmpC酶情况；运用Kirby-Bauer琼脂扩散法进行菌株的药物敏感性测定。
结果:第一部分中的34株产CTX-M酶菌株中有28株同时产2种或2种以上的β-内酰胺酶；产CTX-M酶菌株对氨苄西林、头孢唑啉、头孢噻肟、头孢曲松、头孢呋辛钠、哌拉西林、环丙沙星、头孢吡肟、头孢哌酮/舒巴坦、头孢他啶、头孢西丁、庆大霉素、哌拉西林/他唑巴坦、氨曲南、亚胺培南和美洛培南的耐药率分别是100％(34/34)、100％(34/34)、100％(34/34)、100％(34/34)、100％(34/34)、100％(34/34)、97.1％(33/34)、52.9％(18/34)、52.9％(18/34)、32.4％(11/34)、38.2％(13/34)、76.5％(26/34)、23.5％(8/34)、64.7％(22/34)、0(0/34)、0(0/34)；不产CTX-M酶菌株对上述药物的耐药率分别是100％(16/16)、93.7％(15/16)、75.0％(12/16)、68.7％(11/16)、93.7％(15/16)、93.7％(15/16)、56.2％(9/16)、18.7％(3/16)、6.25％(1/16)、75.0％(12/16)、62.5％(10/16)、62.5％(10/16)、37.5％(6/16)、75.0％(12/16)、0(0/16)、0(0/16)。产CTX-M酶菌株对头孢噻肟、头孢曲松、环丙沙星、头孢吡肟、头孢哌酮/舒巴坦的耐药水平高于不产CTX-M型ESBLs菌株(p<0.05)，对头孢他啶的耐药水平低于后者(p<0.01)。
全文结论：
1．每一种CTX-M基因亚型均具有特定的洗脱峰型，DHPLc可应用于CTX-M型ESBLs的基因型检测，准确性较高，具有简便快捷、经济等特点：
2．产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中CTX-M基因亚型主要是CTX-M-14、CTX-M-3、CTX-M-9、CTX-M-19和CTX-M-13；
3．产CTX-M酶菌株中绝大多数同时产其他多种β-内酰胺酶；
4．产CTX-M酶菌株比不产CTX-M酶菌株耐药性更高，并且耐药表型呈多样性；产CTX-M酶菌和不产CTX-M酶菌均对亚胺培南或美洛培南敏感性高达100％(50/50)。