上皮性卵巢癌(EOC)是最常见的妇科恶性肿瘤之一，全球每年有>23000例新发及>14000例死亡病例。临床上大多数EOC患者在就诊时都已处于肿瘤晚期，晚期上皮性卵巢癌的5年生存率低于30％。目前对导致这一恶性肿瘤的发生、发展的分子作用机理仍知之甚少，临床上对EOC的早期筛查和早期诊断的难度较大。因此寻找可以在高危人群中筛选、协助早期诊断EOC的患者肿瘤分子标志物及其相关分子机制一直是国内外肿瘤学者研究的热点。近年来，随着基因技术的快速发展，肿瘤分子标志物的研究方向已经从CA125、CA199等蛋白质层面深入到了更本质的基因转录层面。微小RNA(miRNA)是一类长约19～25个核苷酸的小分子非编码RNA，通过与其靶mRNA分子的3’端非编码区域(3UTR)互补配对使目标mRNA分子受到翻译水平调控或直接导致其降解，参与调控细胞生长分化、能量代谢、凋亡等各个重要而基本的细胞生理过程。miRNA调节基因表达作用的改变与肿瘤的发生、发展有着密切的联系，因此其作为新的肿瘤分子标志物具有较好的应用前景。miRNA-200家族在EOC中的表达较其它miRNA高，且与正常卵巢组织中的表达相比在EOC中明显过度表达。细胞的表型改变，即上皮-间充质转变（EMT）是肿瘤发生、发展的重要步骤。miRNA-200家族还参与调节其预测靶基因之一—上皮钙粘蛋白转录抑制因子ZEB及其信号网络系统ZEB1/deltaEF1、ZEB2/SIP1，从而通过调节细胞的EMT与MET（间充质-上皮转变）的平衡，最终影响EOC的发生、发展。　　目前检测miRNA表达最灵敏、可靠的方法是实时定量荧光逆转录聚合酶链反应（qPCR)，但常规的qPCR无法扩增只有19～25个核苷酸组成的miRNA分子，需要特殊的设计或对样品特别处理，常用的处理方法主要包括茎环法和PAP法。2005年，Chen等设计出一种茎环结构的引物，以此代替常规逆转录反应中的随机引物或oligo(dT)引物，对逆转录产物用TaqMan探针实时定量PCR法进行检测，简称茎环法；同年，Shi等利用大肠杆菌poly(A)聚合酶将RNA加上poly(A)尾，用含oligo(dT)的引物进行逆转录反应，对产物用荧光染料SYBR Green I实时定量PCR法检测，简称PAP法。茎环法的特异性和灵敏度比PAP法高，但引物设计难度大，检测通量低；PAP法引物设计难度较低，检测通量较高，但特异性和灵敏度较差。PAP法实时定量PCR适于大规模miRNA筛选实验，而本研究采用的茎环法实时定量PCR则适于有针对性地检测小规模miRNA。　　除ZEB以外，转化生长因子TGF-β2、胰岛素样生长因子受体IGF-1R也是Target Scan软件对miRNA-200家族的常见的预测靶基因，TGF-β2及IGF-1R在EOC中高表达，TGF-β2信号通路及IGF-1R信号通路也参与调节肿瘤发生发展的重要机制之一—EMT，但国内外也尚未有研究证实TGF-β2、IGF-1R是miRNA-200家族的靶基因，TGF-β2、IGF-1R与miRNA-200家族在EOC发生、发展的相关分子机制仍需深入研究。　　目的：在基因水平及蛋白水平检测miRNA-200家族中的miRNA-200a、miRNA-200c及其预测靶基因TGF-β2、IGF-1R在上皮性卵巢癌组织中的表达，探讨它们的相关性及其与临床病理特征间的关系，为探索miRNA-200家族及其预测靶基因在上皮性卵巢癌的发生、发展机制研究提供新的理论依据，为发掘 miRNA-200家族作为新一代的上皮性卵巢癌早期诊断的肿瘤分子标志物的可行性提供理论基础。　　方法：采用茎环实时定量荧光逆转录聚合酶链反应(Real-time Quantitative PCR)TaqMan探针法检测2010年10月至2011年5月在广东省人民医院行手术治疗并经术后病理确诊的35例上皮性卵巢癌、15例良性上皮性卵巢肿瘤及10例正常卵巢的组织标本中miRNA-200a、 miRNA-200c的相对表达量。应用免疫组化SP法（链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法）检测上述组织中TGF-β2、IGF-1R蛋白表达，所有实验数据均使用SPSS.13统计软件进行统计学分析，miRNA-200a、miRNA-200c的相对表达量为计量资料数据经Kolmogorov-Smirno检验为不符合正态分布，三组间比较用Kruskal-wallis Test，组间两两比较用mann-whitney检验，以X± S表示。TGF-β2、IGF-1R各组间率的比较采用卡方检验或fisher确切概率法检验，miRNA-200a、miRNA-200c和TGF-β2、IGF-1R之间的相关性采用Spearman相关分析。双侧P<0.05为有统计学意义。　　结果：1、上皮性卵巢癌组织中miRNA-200a、miRNA-200c的相对表达量(376.80±109.25；392.73±110.11)均高于良性卵巢肿瘤(24.71±6.48；28.33±13.27)及正常卵巢组织(4.65±2.73；3.65±2.01)，差异有显著的统计学意义(P<0.01)，后两组间差异无统计学意义(P>0.05)。上皮性卵巢癌组织中miRNA-200a与miRNA-200c的相对表达量存在正相关关系,差异有显著的统计学意义（r=0.790，P<0.01）。　　2、免疫组化SP法检测TGF-β2、IGF-1R蛋白在上皮性卵巢癌组织中阳性表达率分别为(85.71%；88.57%)，高于卵巢良性肿瘤(40％；46.7%)及正常卵巢(30％；40%)，差异有显著的统计学意义(P<0.01)，后两者间差异无统计学意义(P>0.05)。　　3、上皮性卵巢癌组织中miRNA-200a相对表达量与TGF-β2、IGF-1R蛋白的表达均存在负相关的关系(r=-0.603； r=-0.531，P<0.01)，差异有显著的统计学意义。　　4、miRNA-200a、miRNA-200c的表达与临床分期进展、淋巴结转移存在正相关关系（P<0.05），与卵巢子宫内膜样癌类型存在负相关关系（P<0.05），与组织分化无关。TGF-β2、IGF-1R蛋白的表达均与临床分期进展呈正相关（P<0.05），TGF-β2蛋白在卵巢浆液性癌病理类型中较其它两种病理类型高表达，差异有统计学意义（P<0.05），而与组织分化、淋巴结转移无关(P>0.05)。　　结论：1、miRNA-200家族在上皮性卵巢癌的发生、发展的分子机制中可能具有类似癌基因和抑癌基因的双重性作用：①miRNA-200家族在上皮性卵巢癌组织较良性卵巢肿瘤及正常卵巢组织的高表达，表明miRNA-200家族在上皮性卵巢癌的发生中可能发挥着类似致癌基因的作用。②miRNA-200a、miRNA-200c及其预测靶基因TGF-β2、IGF-1R蛋白在EOC的表达呈负相关，并随着临床分期的进展分别呈下降及上升趋势，提示可能存在IGF-1R/TGF-β2/miRNA-200的信号通路网，不仅高表达的miRNA-200家族可能通过与预测靶基因TGF-β2、IGF-1R结合，发生转录后基因沉默，在翻译水平抑制TGF-β2、IGF-1R的表达，抑制EMT而诱导MET，抑制癌细胞的侵袭和转移能力，表明miRNA-200家族在EOC的发展中可能发挥着类似抑癌基因的作用；而且TGF-β2、IGF-1R也可能可以反过来下调miRNA-200家族的表达，诱导EMT而抑制MET，促进癌细胞的侵袭和转移能力。IGF-1R/TGF-β2/miRNA-200信号通路可能通过调节EMT与MET的平衡，参与上皮性卵巢癌的分子相关机制并在病情演变及进展中发挥重要的作用。　　2、miRNA-200家族有可能作为一种极具潜力的新一代的肿瘤分子标志物应用于EOC的早期诊断，可明确鉴别EOC、良性卵巢肿瘤及正常卵巢组织，具有良好临床诊断应用前景；miRNA-200家族在晚期或淋巴结转移阳性的EOC中低表达，与EOC的进展密切相关。因此，miRNA-200家族同时可能作为预示EOC进展的肿瘤分子标志物，具有相当的临床价值。