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非洲菊萎蔫病是严重影响非洲菊生产的重要病害之一，培育抗病品种是防治该病害最为经济、有效和对环境安全的措施。与抗病基因紧密连锁的分子标记不仅便于抗病基因的鉴定和作图，而且可以对抗病品系进行标记辅助选择，加速育种进程。本研究以抗萎蔫病与感萎蔫病的非洲菊亲本杂交组合06R2的F2代群体为材料，利用混合分组分析(BSA)法，结合RAPD和ISSR两种分子标记，快速获得与抗病基因连锁的两种分子片段。并尝试将两种标记分别转化为SCAR标记。以增强RAPD鉴定结果的准确性和稳定性，探讨ISSR转化的可能性和必要性，分析ISSR方法在抗病分子标记辅助选择上的应用潜力。本文主要内容及研究结果如下：
1.利用BSA法构建了抗性基因混和池与感性基因混合池。从360条RAPD随机引物中筛选出了两条能在抗感混和池间产生稳定差异片断的引物，即OPA-02和OPW-09，它们的序列分别为：5GTGACCGAGT 3和5FGCCGAGCTG3。OPW-09能在抗病池中扩增出一条大小约为1186bp的片断(感病池中不出现)，记为OPW-09-1186.同时用OPW-09对F2代107个单株进行检测，OPW-09-1186的有无比基本符合1:3，与田间观察结果一致，通过交换率推算出OPW-09-1186与抗性基因的连锁距离为12.4cM，连锁程度较为紧密；OPA-02，能在感病基因池中扩增出一条大小约为1616bp的片断(抗病池中不出现)，记为OPA-02-1616.但用OPA-02对F2代107个单株进行检测，OPA-02-1616的有无比为1:0.783(不符合1:3)，推测该片断可能是假阳性的结果。将OPW-09-1186进行回收，克隆，测序，根据序列设计合成了三对特异性的SCAR引物，其中只有一对引物R13-42/R1-3-1228(两端含有OPW-09引物序列)，能成功转化为SCAR标记。用这对引物检测F2代群体，其结果与RAPD标记分析一致。该研究为非洲菊抗萎蔫病品种的分子标记辅助选择与抗性基因的定位克隆奠定了基础。
2.从80条ISSR引物中筛选出了两条能在两个抗感混和池间产生稳定差异片断的引物，即ISSR-11和ISSR-34，他们的序列分别为5CCAGAGGAGGAGGAG3和5CCAGTGGTGGTGGTG3。两者都能在抗病池中扩增出一条大小分别为1492bp及1329bp的片断(在感病池中不出现)，分别记为ISSR-11-1492和ISSR-34-1329，在对F2代进行检测时，两个片断有无的比例皆基本符合1:3。ISSR-11-1492和ISSR-34-1329与抗性基因的连锁距离分别为9.5cM，14.5cM，连锁程度较为紧密。将这两个片断进行回收，克隆，测序，根据序列各设计合成了两对SCAR引物，都不能成功转化为SCAR标记，这表明ISSR难以转化成SCAR标记，可能因为ISSR引物本身比较长，再增加2-5个碱基意义不大，因此笔者认为ISSR标记没有必要转化为SCAR标记，可以直接用于非洲菊的抗病品种的快速鉴定上，这在一定程度上还降低了成本，如能与RAPD标记同时使用，将使鉴定结果更加准确，可望在生产中推广使用。