一、研究背景 胃酸分泌及其调控机制一直是消化病学基础理论研究的重要课题。溃疡病的发生与胃酸分泌有密切的关系。胃酸由壁细胞分泌，壁细胞能逆H~+离子梯度而分泌HCl，对壁细胞HCl分泌的调控是综合性的。从胃粘膜分离壁细胞，有益于深入探讨壁细胞的功能，阐明与HCl分泌相关的生理机制。采用膜片钳方法，在细胞水平和膜水平上，研究壁细胞的K~+离子通道，可阐明K~+离子通道的定位、分类、和特性，进而探讨K~+离子通道在壁细胞中的生理、病理、或药理作用。IL-1β是已知具有胃细胞保护性、抗溃疡、抗分泌和延迟胃排空的最强力因子。壁细胞上存在Ⅰ型IL-1受体，介导IL-1β与之结合，产生对壁细胞泌酸的抑制作用。 二、研究目的 ①研究高温对溃疡大鼠胃窦粘膜胃泌素、生长抑素、胃动素的影响。②采用胶体金免疫电镜方法，对大鼠胃窦粘膜G、D细胞进行观察和分析。③建立粘膜刮取式的大鼠壁细胞急性分离方法，并对壁细胞进行多角度鉴定。④采用膜片钳方法研究大鼠壁细胞K~+离子通道特性。⑤在细胞水平上研究IL-1β对壁细胞的作用，和研究IL-1β对壁细胞K~+离子通道的调控作用。 三、材料和方法 ①42只Wistar大鼠随机分为6组，以冰乙酸注入大鼠胃窦前壁制作胃溃疡模型，放免法检测动物在不同温度下胃窦粘膜的胃泌素、生长抑素、胃动素水平。②采用胶体金免疫电镜方法并加以改良，对大鼠胃窦粘膜G、D细胞进行观察，同时对G、D细胞内胶体金颗粒数目进行定量分析。③采用粘膜刮取式方法，对大鼠胃粘膜细胞急性分离。采用相差显微镜、HE染色、电镜、荧光显微镜、免疫细胞化学染色等方法，对壁细胞进行观察和鉴定，并测定壁细胞直径的大小。④采用膜片钳方法，对大鼠壁细胞r离子通道进行全细胞电生理记录，分析壁细胞r离子通道的基本特性。⑤采用HE染色、免疫细胞化学染色方法，观察11p对壁细胞形态的作用，采用膜片钳方法，记录和分析乙lp对壁细胞r离子通道的作用。四、结果 ①胃溃疡后胃窦粘膜胃泌素、胃动素水平上升，生长抑素水平下降。高温溃疡组的溃疡后胃窦粘膜胃泌素、胃动素上升幅度较适温对照组的上升幅度减小，高温溃疡组的溃疡后胃窦粘膜生长抑素下降幅度较适温对照组的下降幅度减小。②免疫胶体金颗粒分布于G、D细胞中，标记胃泌素或生长抑素的金颗粒，主要呈分叶状或岛状的聚集体，多数游离存在于G、D细胞基底膜侧的胞浆中，少部分定位在G、D细胞核内。③成功地急性分离了大鼠胃粘膜细胞，同时证实壁细胞在所分离的细胞中直径最大。④大鼠壁细胞的全细胞r离子电流具有电压依赖性，兼有外向整流性和内向整流性。壁细胞的全细胞r离子电流具有自反馈调节功能。电极液含冉TP，r离子电流持续时间较长;电极液不含冉TP，则r离子电流持续时间较短。IQmM抓化TEA部分阻断壁细胞外向去极化r离子通道电流。10mM乙酸TEA、10mM氛化钡、10血M乙酸钡能使壁细胞外向去极化r离子通道电流增加。⑤10书幼11p给药的壁细胞较正常对照的壁细胞直径减小;10-5幼‘lp给药能使壁细胞外向去极化r离子通道电流增加。五、结论 ①高温会对胃溃疡大鼠胃窦粘膜的胃泌素、生长抑素、胃动素含量产生影响。②通过免疫电镜方法观察到了G、D细胞，发现胃泌素分泌颗粒、生长抑素分泌颗粒分别定位在G、D细胞的细胞浆和各自的细胞核内。③采用刮取式方法，可以急性分离大鼠胃粘膜壁细胞。④成功记录和分析了大鼠壁细胞的全细胞r离子电流。发现壁细胞全细胞r离子电流具有自反馈调节功能。观察到了冉TP、抓化TEA、乙酸TEA、抓化钡、乙酸钡等对全细胞r离子电流的影响。⑤瓜lp使壁细胞直径减小，使壁细胞外向去极化K介离子通道电流增加。