【摘 要】
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一些编码SCAN结构域的锌指基因在人类基因组中常成簇分布,例如17p12-13的ZNF18,ZNF29,ZNF62和zdp3四个基因.ZNF191是一个早先克隆的含SCAN结构域的锌指基因,并定位于18q12.在
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一些编码SCAN结构域的锌指基因在人类基因组中常成簇分布,例如17p12-13的ZNF18,ZNF29,ZNF62和zdp3四个基因.ZNF191是一个早先克隆的含SCAN结构域的锌指基因,并定位于18q12.在此,我们识别了人类两个新型含SCAN结构域基因ZNF396和ZNF397,它们与ZNF191和ZNF271基因一起成簇地分布于18q12的32850-33000k区域.我们鉴定了SCAN-(C<,2>H<,2>)<,x>基因会在其羧基端截除锌指结构域.这种独特的变异剪接形式使ZNF191、ZNF396和ZNF397基因分别产生两种不同的蛋白质.编码有锌指结构域的三种异构型分别命名为ZNF191-fu,ZNF396-fu和ZNF397-fu(full zinc finger),同时,不编码锌指结构域的三种异构型被命名为ZNF191-nf,ZNF396-nf and ZNF397-fn(no zine finger).含成年人16种组织的northern印迹膜分别用同位素标记的ZNF-nf,ZNF396-nf或ZNF397-nf cDNA进行杂交,发现ZNF191的2.0-kb,3.7-kb和7.5-kb三种剪接本在睾丸组织中同时表达,ZNF396的1.5-kb,2.5-kb和3.9-kb三种剪接本在肝脏组织中同时高表达,ZNF397的1.7-kb,2.5-kb,7.0-kb和9.0-kb四种剪接本在睾丸组织中同时高表达.它们的组织表达谱差异很大.通过缺失实验,含SCAN结构域的ZNF397-fu第aa3-250位肽段弥散分布于整个细胞,与ZNF397-nf的定位相似;无SCAN结构域的ZNF-fu第aa224-534位片段定位在细胞核,与ZNF397-fu的定位相似.因此推导ZNF397-fu的核定位信号序列在其锌指结构区域,即氨基酸第251至534位范围.这三个基因的六种异构型蛋白质,除ZNF397-fu之外均能抑制报告基因的转录.然而,ZNF191-fu和ZNF397-nf两种异构型的转录抑制作用更强.若被截除九个锌指重复结构,ZNF397-fu成为一个转录激活因子.通过系列缺失实验,表明ZNF191-fu的各个亚结构域对于其抑制转录所贡献的作用不尽相同.最后,将ZNF191-fu的中间第139-247位片段与GST表位融合,所表达的融合蛋白免疫兔子,该抗体经亲和层析纯化后可灵敏地检测转染表达的和某些组织内源的ZNF191蛋白质分子.
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