4株鳖源致病性嗜水气单胞菌对氨氮和亚硝酸盐的耐受与响应特征

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采用分光光度法研究在氨氮、亚硝酸盐及两者复配组合条件下,对四株鳖源致病性嗜水气单胞菌ZHYYZ-1、ZHYYZ-2、ZHYYZ-3、ZHYYZ-4生长的影响,结果表明:(1)在氨氮质量浓度2g/L时对实验菌的生长均无显著性的影响,随着氨氮浓度的增大,对实验菌生长的抑制作用均呈增大趋势,延迟期相应增长。(2)在亚硝酸盐质量浓度0.2g/L时对实验菌的生长均无显著性的影响,随着亚硝酸盐浓度的增大,对实验菌生长的影响作用基本同氨氮,但对延迟期的作用没有氨氮的影响大。(3)氨氮和亚硝酸盐复配组合条件下,以氨氮的半致死浓度(M)和亚硝酸盐的半致死浓度(N)设置梯度浓度组合,在高浓度氨氮和低浓度亚硝酸盐组合(0.8M+0.2N)时,实验菌的24h生长量均达到最大,而在低浓度氨氮和高浓度亚硝酸盐组合(0.2M+0.8N)时,其24h生长量均达到最小。采用PCR技术对嗜水气单胞菌的AHH、Aha、OMP和AerA四个毒力基因进行分布检测表明:四个毒力基因在分离的四株嗜水气单胞菌中均有分布。采用RT-PCR技术对四个毒力基因表达进行半定量检测,结果表明:在氨氮、亚硝酸盐,及两者双重胁迫下,AHH、Aha和OMP三个毒力基因均有表达,且在亚硝酸盐胁迫下,随着浓度的升高对AHH、OMP及Aha三个毒力基因的表达有抑制作用;AerA基因在氨氮单独胁迫、氨氮和亚硝酸盐双重胁迫下几乎没有表达,而在亚硝酸盐胁迫下,仅ZHYYZ-1在高浓度条件下有微量表达。采用用荧光定量PCR技术,在高浓度氨氮、亚硝酸盐,及两者双重胁迫下,对嗜水气单胞菌ZHYYZ-1的AerA基因表达进行定量检测,结果表明:氨氮胁迫组的整体表达量低于对照组,亚硝酸盐胁迫组的表达量高于对照组,而两者双重胁迫组的表达量最高,且在低浓度氨氮与高浓度亚硝酸盐的组合中更利于AerA基因的表达。
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