干扰素具有抗病毒、调节细胞生长和激活免疫等功效。猪β干扰素(PoIFN-β)可以由成纤维细胞等多种细胞产生,能诱导机体产生多种抗病毒蛋白并具有提升MHCⅠ型分子表达水平、增强NK细胞活性等功能。虽然病毒感染或者利用聚肌胞(ployI:C)均可刺激白细胞生成活性较高的PoIFN-β,但是这些方法所获得PoIFN-β量少且提纯困难。因此体外表达的方式获得PoIFN-β成为了当下解决上述问题的突破口。体外表达可分为原核表达和真核表达,然而PoIFN-β有三个糖基化位点,原核系统无法糖基化修饰,因此本研究打算利用真核表达系统中的毕赤酵母表达系统对PoIFN-β进行体外表达。本实验重新设计了PoIFN-β成熟肽DNA片段,共替换119个碱基,优化的99个密码子约为总密码子的60%,并将GC碱基含量下调至41.1%,使优化后的基因密码子适应指数由0.69上升至0.85。然后将优化后的基因成功构建到诱导型表达载体pPICZαA和组成型表达载体pGAPZαA中,且均在毕赤酵母X33中获得表达。同时这也是PoIFN-β在毕赤酵母中首次成功获得组成分泌型表达,为其在pGAP表达系统的表达打下基础。但两者的表达量均较低,且表达量差异不大。因诱导型毕赤酵母表达系统需以甲醇(有毒易燃易爆)为诱导剂,影响表达蛋白成为工程化产品。因此在PoIFN-β实现毕赤酵母组成分泌型表达的基础上,摸索时间、pH值、抗性、碳源、培养基、接种量等条件对表达的影响,从而确定PoIFN-β在毕赤酵母组成分泌型的最佳表达条件。结果最佳表达条件为:2mg Zeocin筛选菌株按1%接种量于BMGY培养基表达时,24h补加1%的甘油碳源,48h即达到最高表达量,表达量约11.25mg/L,较传统YPD培养基组成型表达时间缩短了48h,且使表达量最高提升了4.3倍。影响外源基因在毕赤酵母实现组成分泌型高效表达的因素较多,尤其与发酵工艺、碳源等息息相关。本实验通过摸索PoIFN-β在pGAP表达系统的最佳表达条件,从而简化了PoIFN-β的下游表达程序(无需添加甲醇、更换碳源),也为PoIFN-β实现发酵罐连续发酵生产奠定了一定基础。