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目的:乳腺癌作为威胁女性身心健康首位的恶性肿瘤,发病率呈逐年上升趋势。由于发病原因尚未完全阐明,因此预防、早期筛查和诊断便成为治愈的关键,这就使得分子生物技术倍受关注。CCL5趋化细胞因子是一种炎症细胞因子,趋化T细胞和单核细胞,在肿瘤生长和转移中具有多重效应,包括抑制肿瘤细胞的免疫效应、促进肿瘤的生长、新血管的生成和转移等,也是乳腺肿瘤细胞表达的主要趋化因子,与乳腺癌的进展息息相关,p38是细胞内重要的信号通路,可以调节很多细胞因子的表达。本实验拟对LPS诱导小鼠乳腺癌4T1细胞系引起CCL5的表达升高的机制展开进一步研究。方法:1用RT-PCR和Western Blot的方法检测小鼠乳腺癌细胞系4T1表面TLR4的表达及诱导表达。2 LPS诱导4T1细胞,提取总RNA,用RT-PCR检测MCP-1、VEGF和CCL5在基因水平的表达情况。同时用实时定量PCR的方法进行检测MCP-1、VEGF和CCL5在基因水平的表达情况。3用Western Blot的方法检测LPS诱导4T1细胞后MAPK中T-p38和P-p38、T-Erk和P-pErk、T-JNK和P-JNK及NF-κB中T-p65和P-p65的蛋白表达变化。4采用实时定量PCR的方法来检测使用通路抑制剂后LPS诱导的4T1细胞的CCL5的表达。5构建携带目的基因重组质粒并在小鼠巨噬细胞RAW264.7进行脂质体转染。在荧光素酶检测仪上进行荧光素酶的数据测定。6划痕实验和Transwell实验检测p38抑制剂对4T1细胞迁移及侵袭能力的影响。7用免疫印迹法来检测使用p38抑制剂后的4T1细胞EMT相关蛋白的表达。结果1 LPS诱导及未诱导的两组4T1细胞在基因和蛋白水平均有TLR4的表达。2在基因水平上,LPS诱导4T1细胞组与未诱导4T1细胞组相比较,CCL5表达明显升高,而MCP-1和VEGF的表达没有明显变化。3 LPS刺激4T1细胞后,可以导致p38、Erk、JNK和p65明显磷酸化升高。4 CCL5在使用p38和p65的阻断剂后的表达有差异,且p38阻断剂组与p65阻断剂组相比而言差异更加显著,阻断Erk、JNK后CCL5的表达无明显变化。5荧光素酶检测的结果表明,LPS在4T1细胞上导致的CCL5表达的增高是通过导致启动子表达增高实现的。6 p38抑制剂可以抑制4T1细胞的迁移能力而对侵袭能力没有影响7 p38抑制剂可以抑制EMT的相关蛋白β-catenin和Vimentin的表达,而对Snail的表达无影响。结论:1 LPS诱导4T1细胞使得CCL5表达增高,这种诱导增高是通过使得CCL5启动子的能力增强来实现的。2 p38抑制剂可以抑制4T1细胞的迁移能力和EMT相关蛋白的表达。