嗅觉传入损伤诱导嗅皮层神经元编程的可塑性

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目的:本研究旨在探讨小鼠嗅觉传入损伤后嗅皮层GABA能神经元和锥体神经元内在特性和编码能力改变及神经元网络可塑性变化的机理。  方法:1.嗅觉传入损伤动物模型的建立与鉴定:取出生十二天的FVB-Tg(Gad GFP)4570Swn/J小鼠,予氯仿按10ul/g剂量行左侧鼻腔滴注剥夺其单侧嗅觉,应用行为学 T迷宫实验和嗅上皮 HE组织化学染色方法确定嗅觉剥夺模型的成功建立;2.膜片钳电生理实验:将大脑分离并做矢状切片(400μm),将脑片放置于氧合的人工脑脊液(ASCF)中,25?C下孵育1-2小时后转移至灌流槽,在31?C下对脑片进行灌流;采用IR-DIC光学显微镜(Nikon E600FN)荧光显微镜定位大脑嗅觉皮层GABA能神经元和锥体神经元;运用Axoclamp-200B放大器全细胞记录方法记录大脑嗅觉皮层 GABA能神经元和锥体神经元动作电位的阈电位(threshold potentials,Vts)和绝对不应期(absolute refractory periods,ARP),信号输入Clampex软件获取群集发放的动作电位间距(inter-spike interval,ISI)和动作电位峰时程标准差(standard deviation of spike timing,SDST),使用Clampfit软件进行数据分析。  结果:1.嗅觉剥夺小鼠对食物正确选择成功率明显低于正常小鼠,剥夺侧嗅球与正常侧相比明显缩小,嗅上皮发生明显毁损变化;2.应用膜片钳电生理方法,发现与正常组相比,剥夺组嗅皮层GABA能神经元群集发放动作电位的发放容量降低,动作电位间距ISI延长(P<0.05),神经元内在特性表现为绝对不应期延长(P<0.05)和能障(Vts-Vr)增高(P<0.05);锥体神经元群集发放动作电位的发放容量增加,动作电位间距ISI缩短(P<0.05),神经元内在特性表现为绝对不应期缩短(P<0.05)和能障(Vts-Vr)降低(P<0.01)。  结论:1.应用氯仿鼻腔滴注法可以建立起稳定可靠的嗅觉剥夺动物模型;2.研究发现嗅觉剥夺后,嗅皮层网络神经元出现差异可塑性:GABA能神经元(抑制性神经元)发放动作电位的绝对不应期延长,阈电位提高,发放群集动作电位和编码神经信息的能力降低,功能下调;锥体神经元(兴奋性神经元)发放动作电位的绝对不应期和阈电位降低,发放群集动作电位和编码神经信息的能力增加,功能上调,嗅觉剥夺后嗅皮层兴奋性神经元功能下调和抑制性神经元功能上调导致嗅皮层神经元网络整体兴奋性增强。
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