论文部分内容阅读
β-珠蛋白基因簇是研究真核基因表达调控的良好模型,在个体发生中β-珠蛋白基因簇表现为从5到3依次表达,具有高度的红系组织特异性和发育阶段特异性,虽然α和β两个珠蛋白基因簇不在同一条染色体上,但两类珠蛋白基因表达的终产物始终维持平衡.基因表达是由众多的顺式作用元件(DNA)和反式作用因子(蛋白质)相互作用调控的.β-珠蛋白基因的正确表达主要依赖于两种类型的调控元件:位于基因簇5端的位点控制区(Locus Control Region,LCR)和各珠蛋白基因的启动子等近端调控序列.LCR至少由五个DNasel高敏位点(HS1-HS5)组成.研究发现,LCR的HSs以及单个基因的启动子上,都含有红系特异和公共表达的反式作用因子的结合位点,LCR及其HSs的形成,启动子上转录装置的建立、LCR与下游基因调控元件间的相互联系等,都需要该些顺式作用元件与相关反式作用因子之间的相互作用来介导.因此,研究DNA-蛋白质之间的相互作用对于阐明LCR的作用机制、珠蛋白基因表达调控的开关机制具有重要意义.以往的研究工作主要集中在各HSs的核心区域,对核心旁侧序列功能研究较少,但越来越多的实验证据表明该些序列是LCR行使功能所必不可少的.该文分两部分,分别研究了HS2核心下游两个AT富含区体外结合因子情况和HS3核心上游HS3.5上保守序列内足迹情况.总结:该文分两部分分别研究了HS2两个AT富含区体外结合反式因子和HS3.5在K562、HEL细胞中DNA-蛋白质相互作用.第一部分小结:1、建立了固相DNasel足迹方法;2、采用EMSA分析结合在两个AT富含区的因子,发现仅有K562细胞诱导前后核粗抽提物中有与第一个AT富含区结合的特异因子,此因子在MEL和HeLa中均不存在;3、该特异因子的体外结合序列为:5-TGAATATATATATATATATATATA-3;4、结合在第一个AT富含区的蛋白分子量是28kDa左右;5、该蛋白N-末端测序结果是:GKGDPNKPRG,经上网比较未见同源序列.第二部分小结:1、K562、HEL细胞诱导前后在HS3.5保守序列上的体内足迹情况有明显差异;2、LCR与启动子可能共同参与β-珠蛋白基因的发育调控;3、LCR的各HS发挥功能需要其核心和旁侧序列共同存在,以HS单元(HS unit)的形式起作用,其中HS3.5有助于HS3单元的形成.