论文部分内容阅读
目的研究Ⅱ/Ⅲ期结直肠癌(CRC)中微卫星高度不稳定性及PD-L1、CD8蛋白的表达,并分析其与临床病理特征和复发率的关系。方法1选取福建医科大学附属第二医院2016-3-1至2017-11-30期间141例Ⅱ/Ⅲ分期CRC患者,收集经结直肠癌切除术后并病理确诊为CRC的癌组织标本及血液标本,并收集患者的临床病理资料。采用多重荧光PCR结合毛细管电泳方法检测6个单核苷酸重复位点(NR-21、NR-24、NR-27、BAT-25、BAT-26、MONO-27)以鉴定微卫星状态,筛选出微卫星高度不稳定性(MSI-H)结直肠癌患者作为实验组,再选取剩余部分CRC作为对照组。从收集的临床病理资料分析CRC发病情况及其病理特征。2收集实验组25例和对照组36例的癌组织及其正常肠粘膜组织标本,用免疫组化法检测PD-L1、CD8蛋白,并分析PD-L1、CD8在各型Ⅱ/Ⅲ期CRC中的表达特点。从临床病理资料分析实验组和对照组的发病情况及病理特征。3收集实验组和对照组的随访资料,分析Ⅱ/Ⅲ期CRC、MSI-H CRC、MSI-L/MSS CRC的复发因素。结果1 141例CRC患者中MSI-H 25例,发生率为17.7%;检出微卫星低度不稳定性(MSI-L)17例,发生率为12.1%;检出微卫星稳定型(MSS)99例,发生率为70.2%。实验组和对照组在肿瘤部位、组织类型、分化程度存在明显差异(P<0.05)。2实验组癌组织的PD-L1蛋白表达阳性率为52.0%(13/25),对照组的阳性率为16.7%(6/36),实验组的PD-L1阳性表达率高于对照组(P<0.05)。PD-L1蛋白在实验组及对照组中的正常肠黏膜组织中无阳性表达。实验组癌组织中CD8蛋白表达阳性率为64.0%(16/25),对照组的阳性率为44.4%(16/36),差异无统计学意义(P>0.05)。实验组正常组织中CD8蛋白表达阳性率为52.0%(13/25),对照组的阳性率为30.6%(11/36),差异无统计学意义(P>0.05)。实验组癌组织中PD-L1+/CD8+为48.0%(12/25),PD-L1+/CD8-为4.0%(1/25),PD-L1-/CD8+为16.0%(4/25),PD-L1-/CD8-为32.0%(8/25)。PD-L1与CD8在实验组中的表达差异具有统计学意义(P<0.05)。PD-L1在MSI-H CRC癌组织中的阳性表达与肿瘤分化程度、Ⅱ/Ⅲ期、脉管癌栓存在明显差异(P<0.05)。CD8在MSI-H CRC癌组织中的阳性表达与肿瘤分化程度、淋巴分期、Ⅱ/Ⅲ期、脉管癌栓存在明显差异(P<0.05)。PD-L1、CD8在MSI-H CRC癌组织中表达与肿瘤分化程度、脉管癌栓存在明显差异(P<0.05)。3数据分析显示实验组患者无疾病生存期(DFS)为12.2±1.0月,对照组患者DFS为9.8±0.6月,提示MSI-H CRC患者DFS较长。单因素分析显示肿瘤分化程度、临床分期、肿块直径、脉管癌栓、微卫星状态是影响CRC患者的复发因素(P<0.05),行COX回归模型的多因素分析示微卫星状态是影响Ⅱ/Ⅲ期CRC复发的独立危险因素(P?0.05)。4实验组中PD-L1阴性表达患者DFS为14.9±0.9个月,阳性表达患者DFS为10.1±0.4个月,PD-L1阳性表达患者DF较短(P<0.05)。实验组中CD8阴性表达患者DFS为14.0±1.2个月,阳性表达的患者DFS为11.5±0.8个月,CD8阴性表达患者DFS与阳性表达患者无明显差异(P>0.05)。单因素分析显示分化程度、脉管癌栓、PD-L1、PD-L1/CD8是影响MSI-H CRC的复发因素(P<0.05),行COX回归模型的多因素分析示PD-L1、PD-L1/CD8是Ⅱ/Ⅲ期影响MSI-H CRC复发独立危险因素。分化程度是影响MSI-L/MSSⅡ/Ⅲ期CRC患者复发的独立危险因素。结论1通过PCR检测出CRC患者MSI-H的发生率为17.7%。结肠癌中MSI-H的检出率高于直肠癌;MSI-H CRC在分化程度低且黏液腺癌中多见。2 PD-L1蛋白在MSI-H CRC癌组织中高表达。PD-L1蛋白在正常组织不表达。MSI-H CRC中PD-L1+和CD8+表达较高。3 PD-L1的阳性表达与MSI-H CRC分化程度低、Ⅲ期、脉管癌栓呈正相关。CD8的阳性表达与MSI-H CRC分化程度低、有淋巴结转移、Ⅲ期、脉管癌栓呈正相关相关。PD-L1+/CD8+在癌间质细胞中的共同表达与MSI-H CRC分化程度低、脉管癌栓呈正相关。4微卫星状态是Ⅱ/Ⅲ期CRC影响复发的独立危险因素。5 PD-L1是影响Ⅱ/Ⅲ期MSI-H CRC患者复发的独立危险因素。6分化程度是影响Ⅱ/Ⅲ期MSI-L/MSS CRC患者复发的独立危险因素。