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第一部分靶向IGF-1R的siRNA逆转吉非替尼耐药的人非小细胞肺癌细胞株H1975和H1650耐药的研究目的：研究IGF-1R特异性的siRNA对逆转吉非替尼耐药的人非小细胞肺癌细胞H1975和H1650耐药的作用,并探讨其可能存在的机制。方法：不同浓度的吉非替尼分别处理吉非替尼耐药的肺癌细胞株(H1975和H1650),吉非替尼敏感的肺癌细胞株(HCC827),以及RNAi的表达载体分别转染后的H1975和H1650细胞,采用MTT法检测吉非替尼对各处理组细胞的生长抑制作用;AnnexinV-FITC和PI双标法标记细胞后,在流式细胞仪上检测吉非替尼浓度为0、0.01、0.1和1uM的条件下,处理24h和48h后各组细胞的凋亡水平；Western blot法检测细胞内EGFR、IGF-1R通路相关蛋白和凋亡相关蛋白的表达。结果：HCC827、H1975和H1650细胞株的IC50值分别为0.006±0.0003uM、24.62±0.3uM和18.39±0.2uM。经1uM吉非替尼处理48h后,H1975和H1650细胞中均检出了p-IGF-1R的高表达,而HCC827细胞中则未见明显的p-IGF-1R。当用siRNA技术分别沉默H1975和H1650细胞中的IGF-1R后,吉非替尼在两种细胞中的ICso值分别下降至7.94±0.1uM和9.42±0.4uM,明显低于IGF-1R未沉默的相应细胞(P<0.05)。作用24h和48h时,吉非替尼在IGF-1R沉默后的H1975和H1650细胞中诱导的凋亡比例均明显高于IGF-1R未沉默的相应细胞株(P<0.05)。IGF-1RsiRNA联合吉非替尼作用时明显抑制了H1975和H1650细胞中的p-IGF-1R(?)(?)p-Akt的表达。结论：IGF-1R siRNA能有效增强吉非替尼在耐药的人肺癌细胞株H1975和H1650中诱导的生长抑制和凋亡效应。IGF-1R siRNA技术或可成为逆转EGFR-TKIs耐药的新策略。第二部分联合抑制IGF-1R和NF-KB信号通路逆转吉非替尼耐药的人肺癌细胞株H1650耐药的研究目的：在第一部分研究中我们证明,ⅠGF-1R siRNA能够在EGFR-TKIs耐药的肿癌细胞中提高吉非替尼诱导的生长抑制和凋亡水平。然而,临床试验显示,联合使用IGF-1R印制剂(?)(?)EGFR-TKIs并未能在肺癌治疗中取得显效。新近发现,NF-KB通路是影响肺癌细胞对EGFR-TKIs敏感性的因素。我们旨在探索联合抑制(?)IGF-1R和NF-KB通路能否提高耐药细胞对吉非替尼的敏感性,并探讨其可能的机制。方法：分别用吉非替尼和NF-KB特异性抑制齐(?)JPDTC处理IGF-1R未沉默和沉默的细胞H1650-sictrl和H1650-siIGF-1R。用MTT实验检测(?)PDTC和吉非替尼对各组细胞的生长抑制作用,流式细胞术检测细胞的凋亡水平,EMSA实验检测细胞内NF-kB的DNA结合能力,Western blot法检测细胞内EGFR、IGF-1R和NF-kB信号通路的相关蛋白表达,并检测凋亡相关蛋白PARPcl的水平。结果：IkB在吉非替尼敏感的肺癌细胞HCC827中的水平高于吉非替尼耐药的H1975和H1650细胞,其表达因吉非替尼的作用而上调。在IGF-1R未沉默的H1650-sictrl细胞中,IKB的表达水平低于其在H1650-siIGF-1R细胞中的表达,且两种细胞中IKB水平均随吉非替尼浓度增加而出现上调。与H1650-sictrl细胞相比,PDTC在H1650-siIGF-1R细胞中明显增强了吉非替尼诱导的生长抑制和凋亡效应(P<0.05)。IGF-1R的沉默降低了NF-KB p65在H1650-siIGF-1R细胞核中的累积,NF-κB的DNA结合能力随着IGF-1R和EGFR同时受到抑制而减弱,但仍然具有活性。PDTC对EGFR、IGF-1R、Akt、ERK、p-EGFR、p-IGF-1R、p-Akt和p-ERK等蛋白的表达均无明显影响。结论：在IGF-1R激活的吉非替尼耐药的肺癌细胞H1650中,NF-KB信号通路也处于活化的状态,NF-KB作为下游因子其活性部分受到IGF-1R的调控。联合抑制IGF-1R和NF-kB信号通路能够有效提高吉非替尼在H1650细胞中所诱导的生长抑制和促凋亡作用。