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百合(Lilium)是单子叶植物亚纲百合科百合属多年生草本植物。其花型丰富,花色艳丽,被人们视为喜庆,纯洁,自由和幸福的象征,素有球根花卉之王的美誉。主要应用于切花,盆花和园林布景等多方面。我国百合资源丰富,但育种工作起步较晚,育成具有自主知识产权的品种较少,主栽百合品种依靠国外进口。广东是百合切花的主产区,每年从国外进口百合种球几千万粒,因此选育出适合广东气候条件正常生长和繁殖的具自主知识产权的百合新品种,具有很重要的现实意义。 本研究以东方百合,亚洲百合,OT系百合和麝香百合的11个品种为杂交育种材料,从亲本花粉生活力的测定、花粉管生长延伸过程的荧光显微观察、杂交授粉方法的选择、胚拯救方式的确定、种球的低温休眠与移栽和杂交F1代SRAP分子标记鉴定6方面进行研究,旨在为克服百合杂种系间杂交障碍提供理论和技术依据。主要结果如下: 1、不同品系和品种间花粉生活力存在差异。东方百合花粉生活力最高,然后依次为亚洲百合、OT系百合,麝香百合花粉生活力最低;OT系百合罗宾娜Robina’与黄天霸‘Concador’之间花粉萌发率差异显著,东方百合系和亚洲百合系内各品种花粉生活力差异不大;11个百合品种中,除OT系百合黄天霸‘Concador’和麝香百合雪皇后‘SnowQueen’花粉萌发率分别仅为41.37%和21.82%外,其他品种花粉萌发率均在65%以上,东方百合索邦‘Sorbonne’花粉萌发率最高达到91.14%。 2、对索邦‘Sorbonne’×罗宾娜Robina’,索邦‘Sorbonne’×雪皇后‘Snow Queen’组合花粉管生长延伸过程的荧光显微观察。发现在相同的授粉时间内,罗宾娜Robina’花粉萌发率显著高于雪皇后‘Snow Queen’花粉萌发率;花粉管呈螺旋状,大多数成束缠绕沿花柱向子房生长延伸,部分花粉管出现生长缓慢、顶端膨大或断裂的现象,仅有少量花粉管成功进入子房并沿胚珠珠柄穿过珠孔而受精。 3、三种授粉方式中常规授粉杂交蒴果膨大率和平均结种数均较低;切割柱头授粉在一定程度上能提高大多数杂交组合的蒴果膨大率和平均结种数;切割柱头授粉配合子房涂抹适量0.1%NAA法虽能有效提高蒴果膨大率,但大部分蒴果为假果,真种子数量并未提高。 4、以索邦‘Sorbonne’×索邦‘Sorbonne’,索邦‘Sorbonne’×罗宾娜‘Robina’,索邦‘Sorbonne’×雪皇后‘Snow Queen’组合杂交蒴果为材料,采用子房切片培养,胎座看护培养和胚培养进行胚拯救。结果表明,胚拯救最适方式是胚培养,胚拯救最佳时间为60天。 5、以索邦‘Sorbonne’×索邦‘Sorbonne’,索邦‘Sorbonne’×罗宾娜‘Robina’组合杂交幼胚为材料,筛选出最佳胚培养基成分为MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.20mg/L+蔗糖30g/L+琼脂4g/L。以索邦‘Sorbonne’×索邦‘Sorbonne’杂交幼苗为材料,筛选出最佳鳞茎诱导培养基为MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂4g/L;最佳鳞茎增殖培养基为MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.5mg/L+蔗糖75g/L+琼脂4g/L。将离体诱导获得的百合鳞茎置于0~2℃低温冷藏处理2个月后,置于5℃解除休眠,待鳞茎嫩芽抽生即移栽成活。 6、模板DNA浓度直接影响SRAP-PCR的效果,在20uL PCR体系中模板DNA最适用量为60ng;从64对SRAP-PCR引物中筛选出18对能扩增出亲本特征谱带,重复性较好的引物;选用多态性强,重复性好的引物对F3-R6,对索邦‘Sorbonne’×罗宾娜‘Robina’、索邦‘Sorbonne’×黄天霸‘Concador’和索邦‘Sorbonne’×西伯利亚‘Siberia’组合共7株杂交苗进行SRAP-PCR分子标记鉴定,在子代中均能找到亲本的特征谱带,鉴定了杂交后代杂种的真实性。