野生丹参微生物资源及其对毛状根的诱导效应

来源 :浙江理工大学 | 被引量 : 7次 | 上传用户:R845451732
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丹参(salviae miltiorrhizae)是唇形科鼠尾草属的多年生草本植物,广泛用于心血管疾病的治疗。有效提升丹参活性成分的含量是目前丹参种植的目标之一,微生物对植物生长和次生代谢物合成具有促进作用。本论文研究了野生丹参植株中的微生物对丹参毛状根生长和次生代谢的诱导效应,以为生产中提高丹参品质提供新思路。首先,系统分析了多地区多生境的野生丹参微生物资源并重点研究了它们对丹参次生代谢的影响。结果:1)分离了7个不同地区的丹参微生物,共1022株,鉴定了240株,它们属于63种细菌及7种真菌;多数细菌归属于Pseudomonas、Bacillus、Acinetobacter、arthrobacter、Rhizobium和Sphingobium等属,真菌归属于Aspergillus、Purpureocillium、Aspergillus、Mucor、Hypocrea和Trichoderma等属。2)进一步研究微生物对丹参毛状根药用活性成分的影响,发现一些细菌促进丹酚酸的合成;多数试验真菌显著促进丹参酮的合成。显著促进丹酚酸合成的细菌包括Pantoea dispersa 14DSR23、Pseudomonas chlororaphis subsp.aurantiaCaHYR1、Pseudomonas chlororaphis subsp.aurantia CaHYR26、Pseudomonas chlororaphis subsp.piscium SCR22和Pseudomonas chlororaphis subsp.aureofaciens LNHR13,诱导后丹酚酸B(SAB)的含量为对照组的1.21-2.28倍,诱导后迷迭香酸(RA)的含量为对照组的1.38-2.50倍;显著促进丹参酮合成的真菌有Aspergillus japonicus L74、Purpureocillium lilacinum R75、Aspergillus insuetus R77、Mucor irregularis R78、Hypocrea nigricans S79、Aspergillus japonicus S80、Trichoderma atroviride S81,此外还有部分细菌Pseudomonas sp.DS3G2、HYR1、Pseudomonas vancouverensis DS6,诱导后的总丹参酮含量为对照组1.62-10.14倍。促进总酚酸合成效果最好的菌株是细菌LNHR13,促进总丹参酮合成效果最好的是真菌L74,同时显著促进两类成分合成的是细菌DS3G2、HYR1和DS6。其次,分析了菌株LNHR13促进丹酚酸合成的主要活性成分。1)菌株LNHR13发酵液的水溶性成分以及多糖成分对毛状根的鲜重有显著的促进作用,同时显著促进丹参素钠、RA和SAB三类丹酚酸及总丹酚酸的合成。2)基于GC-MS,从LNHR13的水溶性成分中鉴定出植物生长激素(IAA)、水杨酸(SA)和玉米素(t-ZOG),进一步分析发现促进丹酚酸积累的菌株均含有丰富的植物激素,其中含量最高的为IAA(559.182-71543.05ng/m L),含量次高的为SA(28.86-379.21ng/mL)和t-ZOG(33.619-88.027ng/m L)。采用外源IAA和SA验证发现,IAA和SA均可促进丹参毛状根的生长,SA显著促进丹酚酸的合成。3)验证LNHR13中的胞外多糖对丹参毛状根的诱导作用,发现该胞外多糖显著促进丹酚酸的合成,其最佳浓度为20mg/L和40mg/L,诱导时间为9d。最后,研究了活体菌株LNHR13对丹参毛状根的诱导效应。活菌均抑制毛状根的生长和丹酚酸的合成,但促进丹参酮的生物合成,0.01%的菌体接种时显著促进四种丹参酮的积累。综上,本论文从野生丹参中获得了多种微生物资源,一些细菌显著促进丹参毛状根丹酚酸的合成;一些真菌显著促进丹参酮的合成。对丹酚酸促进作用最强的细菌LNHR13,其主要活性成分是植物激素和胞外多糖。这些结果对于深入研究微生物与植物互作提供了重要参考。
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