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血栓性疾病因其较高的发病率、致残率和死亡率，严重危害人类健康。临床上亟需安全有效、特异性强、无出血副作用、价格合理等特点的溶栓药物。蛇毒纤溶酶可以直接降解纤维蛋白，不依赖血纤溶酶原的激活，出血副作用小，已有制剂用于临床。烙铁头蛇毒液富含血液循环毒素，尤其是纤维蛋白(原)溶解组分，本课题致力于从烙铁头蛇毒中分离出一种新的高效低毒的纤溶组分。烙铁头蛇粗毒经过三步层析首次得到了一个分子量为23301Da的单链金属蛋白酶FⅥaa，该组分能高效水解纤维蛋白原的Aα链及Bβ链；能直接降解纤维蛋白；最小出血剂量为1.08mg。同本实验室已成功提纯的五步蛇毒纤溶组分FⅡa比较，FⅥaa降解纤维蛋白的活性更强，无出血毒性作用。本实验详细介绍了烙铁头蛇毒组分FⅥaa的分离提纯过程及部分生化、生物活性研究。
方法：
1.通过CM Sephadex C-50阳离子交换层析，DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析和Sephadex G-50 fine凝胶过滤层析三步从湖南产烙铁头蛇毒中分离纯化目的组分FⅥaa。
2.SDS-PAGE鉴定纯度。
3.质谱4000 Q TRAP测定分子量。
4.等电聚焦电泳测定等点电。
5.采用偶氮酪蛋白水解法测定FⅥaa对蛋白底物的水解活性。
6.采用纤维蛋白平板法测定FⅥaa对牛纤维蛋白的降解活性。
7.采用普通平板和加热平板比对的方法，了解FⅥaa与UK降解纤维蛋白原理的异同。
8.采用SDS-PAGE的方法观察FⅥaa对牛纤维蛋白(原)的降解方式。
9.偶氮酪蛋白法测定不同温度、不同pH、不同浓度金属离子和抑制剂对FⅥaa酶活性的影响。
10.按照Kondo的方法，小鼠背部皮下注射不同浓度的FⅥaa，分析其出血毒性。
结果：
1.粗毒经CM Sephadex C-50阳离子交换层析得到7个蛋白峰，其中第4峰(FⅣ)和第6峰(FⅥ)具有较强的纤溶活性。FⅥ再经DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析得2个蛋白峰，其中第1峰有纤溶活性，将其再过Sephadex G-50fine凝胶过滤层析得1个蛋白峰，即为目的组分。
2.SDS-PAGE达到电泳纯，结果显示为一单链蛋白质，质谱测定精确分子量为23301.0Da，等电点主带9.09。
3.FⅥaa具有蛋白水解活性，可水解纤维蛋白原，优先降解Aα链，呈时效、量效关系；可直接降解纤维蛋白，不依赖于纤溶酶原的激活。
4.FⅥaa为金属蛋白酶，EDTA和DTT可显著抑制其活性，PMSF和抑肽酶对活性几乎无影响；Mg2+、C2++可增强FⅥaa的酶活性，而Cu2+、Zn2+、Co2+可抑制其活性。酶的适宜pH为8.0-11.0，适宜温度为30-50℃。
5.FⅥaa的最小出血剂量为1.08mg。
小结：
1.通过CM Sephadex C-50阳离子交换层析，DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析和Sephadex G-50 fine凝胶过滤层析三步从湖南产烙铁头蛇毒中分离纯化目的组分——FⅥaa，回收率为0.78％。
2.FⅥaa为单链金属蛋白酶，分子量为23301.0kDa，等电点9.09左右。
3.FⅥaa能水解纤维蛋白和纤维蛋白原，作用呈量效、时效关系，优先降解α链。蛋白水解作用的适宜pH为8.0-11.0，适宜温度为30-50℃。
4.FⅥaa为非出血性蛇毒纤溶酶。