SU11274影响食管癌Eca109细胞生物学行为的时辰效应探讨

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目的:本文旨在研究c-Met抑制剂SU11274对食管癌Eca109细胞株生物学行为的影响,并通过其作用靶点c-Met蛋白和C-met mRNA与生物钟基因Clock mRNA的可能潜在联系,进一步探讨在其作用过程中是否有时辰效应的存在。方法:(1)体外培养食管癌Eca109细胞株,用免疫细胞化学检测c-Met蛋白的表达。(2)用SU11274(IC50为20nM)处理Eca109细胞,通过MTT生长曲线、划痕实验、transwell侵袭小室以及FCM,观察药物对细胞生长、迁移、侵袭能力以及凋亡率与细胞周期的影响。(3)体外培养食管癌Eca109细胞株,用RT-PCR法分别检测不同时间点Clock与C-met mRNA的表达。(4)用流式细胞仪检测各时间点c-Met蛋白的表达。(5)不同时间点SU11274处理细胞24h后,用流式细胞仪检测细胞周期。结果:(1)Eca109细胞表达c-Met蛋白。(2)SU11274实验组细胞生长,迁移和浸润能力低于对照组,凋亡率高于对照组,增殖指数低于对照组。(3)48h内Clock基因表达呈节律性波动(P<0.05)。(4)24h内Clock与C-met基因表达呈相似节律性波动(P<0.01),。(5)24h内c-Met蛋白表达呈节律性波动(P<0.05),出现表达高峰的时间点与C-met mRNA表达高峰时间点一致。(6)不同时间点SU11274处理细胞后,细胞增殖指数抑制率不同(P<0.01)。结论:(1)c-Met抑制剂SU11274可以抑制Eca109细胞的生长和增殖,减弱迁移和浸润能力,增加细胞凋亡。(2)证实体外培养的食管癌Eca109细胞Clock的表达随时间变化存在节律性。(3)首次发现食管癌Eca109细胞C-met mRNA与c-Met蛋白在24小时内的表达呈节律性波动。(4)在不同时间点经SU11274处理后,细胞增殖指数抑制率不同,提示提示在食管癌靶向治疗中要考虑时辰效应。
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