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家蚕核型多角体病毒(BmNPV)是杆状病毒的模式病毒之一，由该病毒所引起的家蚕核型多角体病毒病是导致我国夏秋季蚕茧减产的重要原因之一。生命有机体在生长繁殖过程中的一个主要事件就是遗传信息的传递，母代的遗传信息经过DNA的精确复制得以传递给子代，在此过程中DNA聚合酶发挥着重要作用。由BmNPV ORF53编码的家蚕核型多角体病毒DNA聚合酶(BmNPV-POL)就扮演着这一重要角色。但是国内外对BmNPV-POL的研究较少，无法获得高纯度的活性蛋白可能是其原因之一。 本研究首先采用E.coli表达系统来尝试表达目的蛋白。通过对该基因序列进行密码子的优化以促进蛋白的表达效率，经全序列合成之后成功构建到pGEX-4T-2载体上，经诱导表达后用GST亲和层析柱和Mono Q离子交换柱纯化出了高纯度的融合蛋白GST-BmNPV-POL，经Western Blot分析和质谱检测结果正确，但所纯化出的酶活性较低，无法满足后续酶学功能分析的要求。因此，本课题研究又利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统来制备带His标签的融合蛋白。首先构建带目的基因的重组病毒并感染Sf-9昆虫细胞，利用Ni-NTA亲和层析柱从感染后的细胞粗纯化目的蛋白，再利用Mono Q离子交换柱进行进一步纯化，获得的目的产物经质谱鉴定结果正确。 Superose6分子筛层析分析结果表明，真核系统表达的BmNPV-POL是以单聚体的形式在细胞内表达和装配，分子量约为110 KDa，与理论分子量一致。通过以poly(dA)/oligo(dT)为引物/模板的DNA聚合酶活性分析，获得了最佳的反应条件，在27℃，pH为8.0的条件下，反应30min左右，酶活性达最佳，其酶的比活性高达15，126.3 U/mg。研究发现KCl对BmNPV-POL的DNA聚合酶活性有一定的抑制作用，在0-50 mM浓度范围内酶活性几乎不受影响，但盐浓度超过50mM后，随着KCl浓度的升高，酶活性迅速降低。DMSO也会抑制酶的活性，随着DMSO浓度的升高，酶活性逐渐减低，在20％的DMSO存在的条件下，酶活性降至原来的三分之一。此外，该酶对Aphidicolin比较敏感，0.125μg/mL浓度的Aphidicolin就能使得酶活性急速下降。在以单链环状M13为模板的“M13”DNA活性分析时发现，BmNPV-POL在DNA复制过程中不依赖PCNA和RFC，但SSB可以促进病毒DNA的复制进程。 本论文研究结果为家蚕杆状病毒DNA复制机制的研究打下理论基础，也为由于BmNPV引起的家蚕脓病的生物防治以及利用家蚕作为生物反应器制备外源蛋白提供理论基础。