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背景:癫痫是由各种原因导致的脑部神经元高度同步化异常放电的慢性脑部疾病,具有较高的患病率、致残率、死亡率。反复发作的癫痫可加重脑神经元的损伤,据报道自噬可能参与了癫痫后脑损伤的病理生理机制。适度的自噬对机体维持内环境的稳态起着不可或缺的作用,但是过度激活的自噬反而会造成机体细胞的死亡。有研究显示自噬可能是癫痫后海马神经元死亡的原因且与癫痫后脑损伤密不可分。目前临床以抗癫痫药治疗为主,但缺乏很有效的脑保护剂。因此把自噬作为靶点来寻求有效的治疗药物是今后研究中不可忽视的新方向。天麻素(GAS),是天麻中最重要的生物活性成分,临床用于治疗头痛、头晕等疾病。有研究显示在双侧颈总动脉结扎诱导的血管性痴呆(VD)模型中,天麻素通过抑制自噬减轻海马神经元损伤。这提示我们天麻素可能通过抑制自噬减轻癫痫后脑损伤,但具体作用及机制仍需进一步研究。本研究旨在观察自噬在癫痫持续状态(SE)中的表达特点及天麻素对癫痫持续状态后脑损伤的作用,从而为探索癫痫脑损伤的发病机制及临床治疗提供新的思路和实验依据。方法:(1)本实验通过建立匹鲁卡品诱导的癫痫持续状态(SE)模型,选择56只雄性C57BL/6黑色小鼠,将小鼠随机分为对照组、SE组,分别于SE后6 h、12 h、24 h、48 h、72 h、96 h取海马组织,每组4只。应用qRT-PCR与Western blot分别检测海马组织中Beclin-1及LC3的mRNA及蛋白水平的表达及变化规律。(2)选择40只雄性C57BL/6黑色小鼠,按上述方法制作模型,按不同处理随机分为对照组、SE组、GAS50 mg/kg组、GAS100 mg/kg组、GAS150 mg/kg组,每组4只,将0.2g天麻素注射液溶于83 ml生理盐水中,分别按50 mg/kg、100 mg/kg、150 mg/kg剂量腹腔注射给药,2次/日,于SE后自噬活性表达最高的时间点取海马组织,应用qRT-PCR与Western blot分别检测海马中Beclin-1及LC3的mRNA及蛋白水平的表达及变化规律。(3)选择32只雄性C57BL/6黑色小鼠,按上述方法制作模型,将小鼠随机分为对照组、SE组、GAS150 mg/kg组、WM组,每组4只,将5 mg WM溶于1 ml二甲基亚砜(DMSO)中,后用生理盐水配制于12.5 ml,按1 mg/kg剂量在给予硫酸阿托品30 min前腹腔注射干预,于SE后自噬活性表达最高的时间点取海马组织,应用qRT-PCR与Western blot分别检测海马中Beclin-1及LC3的mRNA及蛋白水平的表达及变化规律。结果:(1)与对照组相比,小鼠海马组织Beclin-1 mRNA的表达在SE后72 h达最高,96 h开始下降,但仍未降至正常水平,差异具有统计学意义(P﹤0.05);与对照组相比,Beclin-1蛋白的表达在SE后72 h达最高,差异具有统计学意义(P﹤0.05)。(2)与对照组相比,小鼠海马组织LC3 mRNA的表达在SE后72 h达最高,96 h开始下降,但仍未降至正常水平,差异具有统计学意义(P﹤0.05);与对照组相比,LC3II/I比值在SE后72 h达最高,差异具有统计学意义(P﹤0.05)。(3)与对照组相比,小鼠海马组织Beclin-1 mRNA的表达在SE组明显升高;与SE组相比,Beclin-1 mRNA的表达在GAS100 mg/kg组开始降低,于GAS150mg/kg组降至最低,差异具有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,Beclin-1蛋白的表达在SE组明显升高;与SE组相比,Beclin-1蛋白的表达在GAS150 mg/kg组降至最低,差异具有统计学意义(P<0.05)。(4)与对照组相比,小鼠海马组织LC3 mRNA的表达在SE组明显升高;与SE组相比,LC3 mRNA的表达在GAS100 mg/kg组开始降低,于GAS150 mg/kg组降至最低,差异具有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,LC3II/I比值在SE组明显增高;与SE组相比,LC3II/I比值在GAS100 mg/kg组开始降低,在GAS 150 mg/kg组降至最低,差异具有统计学意义(P<0.05)。(5)与对照组相比,小鼠海马组织Beclin-1 mRNA的表达在SE组明显升高;与SE组相比,Beclin-1 mRNA的表达在GAS150 mg/kg组显著降低;与GAS150mg/kg组相比,Beclin-1 mRNA的表达在WM组增高且低于SE组,差异具有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,小鼠海马组织的Beclin-1蛋白的表达在SE组明显升高;与SE组相比,Beclin-1蛋白的表达在GAS150 mg/kg组显著降低;与GAS150 mg/kg组相比,Beclin-1蛋白的表达在WM组显著增加,但仍低于SE组,差异具有统计学意义(P<0.05)。(6)与对照组相比,小鼠海马组织LC3 mRNA的表达在SE组明显升高;与SE组相比,LC3 mRNA的表达在GAS150 mg/kg组显著降低;与GAS150 mg/kg组相比,LC3 mRNA的表达在WM组增高,且低于SE组,差异具有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,LC3II/I比值在SE组明显升高;与SE组相比,LC3II/I比值在GAS150 mg/kg组显著降低;与GAS150 mg/kg组相比,LC3II/I比值在WM组显著增加,但仍低于SE组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:(1)Beclin-1、LC3在SE小鼠中表达增高,增高程度具有时间依赖性,提示自噬可能参与了SE后脑损伤;(3)天麻素可降低Beclin-1、LC3表达,降低程度与天麻素剂量相关,提示天麻素可能对SE后脑损伤具有保护作用;(5)WM可减弱天麻素对自噬活性因子Beclin-1、LC3的影响,提示天麻素可能通过调节自噬在SE后脑损伤中发挥作用。