论文部分内容阅读
目的：近年来,肺腺癌逐渐取代鳞癌成为肺癌的主要病理类型。外科手术和传统放化疗疗效虽可靠,但其发展带来的益处进入相对稳定的平台期,而靶向治疗和新型分子靶向药物的研制成功为抗肿瘤研究带来良好前景。人类YB-1蛋白(Y box-binding protein-1)为一类特异性结合目的基因启动子和增强子内部Y-box序列的重要核转录和翻译因子。表皮生长因子受体(EGFR)启动子区域含有Y-box序列。二者在肿瘤的启动、增殖、侵袭及转移等方面具有重要的病理学作用。本实验在以上相关知识基础上,运用RNAi(RNA interference)技术,静默肺腺癌细胞株A549中YB-1蛋白的表达,探讨YB-1蛋白静默前后EGFR表达及细胞增殖的差异性,从而判定YB-1蛋白对EGFR表达是否具有调控作用及其对细胞增殖的影响。方法：采用Lipofectamine2000转染试剂将Santa Cruz公司生产的YB-1siRNA片段导入肺腺癌细胞A549中,以正常组、单纯Lipofectamine2000处理组和Control siRNA组为对照。在保证所选YB-1 siRNA片段有确切效果的基础上,通过RT-PCR、Western Blot方法分析各组YB-1静默前后YB-1和EGFR的基因及蛋白在A549细胞株中的表达变化；运用MTT法检测YB-1 siRNA对细胞增殖的抑制率。以上实验数据采用SPSS11.5统计软件处理。所有实验重复3次,计量资料以均数±标准差((?)±S)表示,采用单因素方差分析检验实验组间差异是否具有显著性(P<0.05)。结果：1. RT-PCR和Western Blot结果显示A549细胞经YB-1 siRNA干扰后YB-1 mRNA和蛋白的表达出现明显下降,EGFR mRNA和蛋白的表达亦出现下降(P<0.05),初步证实肺腺癌细胞A549中YB-1对EGFR具有调控作用。2.MTT检测显示YB-1 siRNA达到一定剂量后的干扰对细胞增殖产生抑制作用(0.0625μl,P>0.05；0.125μl,P<0.05)且存在最佳抑制剂量。结论：1.通过RT-PCR和Western Blot方法从基因和蛋白两方面初步证实YB-1蛋白对EGFR的表达具有调控作用。2.通过MTT法检测证实YB-1 siRNA干扰可以抑制肿瘤细胞的增殖且存在最佳剂量。