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断奶仔猪多系统衰弱综合征(Postweaning Multisystemic Wasting Syndrome,PMWS)主要是由猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type2,PCV2)引起的以生长缓慢、高度呼吸困难、严重腹泻、黄疸、淋巴结极度肿大等为典型特征的疾病,多发猪群是6~16周龄的仔猪。我国自从2000年首次发现该病以来,现在已经有20多个省、自治区、直辖市发现猪群中有PCV2的感染,阳性率为21%~96%。同时,PCV2进入机体后,能够破坏机体免疫系统,导致免疫力降低,造成与其他疾病的混合感染。因此,每年由该病造成的经济损失非常巨大。目前该病没有有效的治疗方法,疫苗免疫已经被证明是最有效的防控途径。传统的灭活疫苗存在着病毒增殖滴度低、生产成本高等问题,同时该类疫苗也有灭活不彻底的风险,目前已经逐渐被亚单位疫苗取代,尤其是圆环病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs)疫苗。Cap蛋白由于是圆环病毒唯一的结构蛋白,自身能够组装成VLPs,并且免疫后可诱导针对PCV2的完全保护性免疫,因此成为圆环亚单位疫苗研究的首选抗原。本论文根据实验室分离鉴定的PCV Cap基因序列,按照酵母密码子偏好性,进行密码子优化,构建了Cap蛋白的酵母表达载体,实现其分泌表达及VLPs组装,并用小鼠模型进行动物试验评价免疫效果,结果如下:1.成功构建了重组质粒pPICZα-A-AHCap、pPICZα-A-AHCap-Fla、pPICZα-A-SUMO-AHCap和酵母表达菌株GS115-pPICZα-A-AHCap、GS115-pPICZα-A-AHCap-Fla、GS115-pPICZα-A-SUMO-AHCap。2.利用以上构建的酵母表达菌株,成功获得了重组蛋白AHCap、AHCap-Fla、SUMO-AHCap。3.透射电镜观察纯化后的重组蛋白,结果发现:融合了SUMO标签的Cap蛋白(SUMO-AHCap)没有VLPs的形成,N端缺失32个氨基酸的AHCap以及在C端融合flagellin佐剂的AHCap(AHCap-Fla)明显可以看到直径在20 nm左右的VLPs,并且重组蛋白AHCap形成的VLPs比AHCap-Fla多。4.将纯化的重组蛋白AHCap、AHCap-Fla定量后制备亚单位疫苗,免疫小鼠检测其免疫原性。间接ELISA结果显示试验组小鼠血液中均含有PCV2的特异性抗体和中和抗体,IFN-γ和IL-2表达量均升高,并且在攻毒后的小鼠血清中未检测到病毒,而免疫重组蛋白AHCap-Fla的抗体滴度和细胞因子(IFN-?、IL-2)分泌高于IFN-?、IL-2组,说明重组蛋白AHCap-Fla和AHCap具有较好的免疫原性,但是重组蛋白AHCap-Fla的免疫效果更好。综上,本文利用毕赤酵母表达系统表达的重组蛋白AHCap、AHCap-Fla都可自组装成VLPs,并都具有较好的免疫原性,以上结果为PCV亚单位疫苗的研发提供了新思路。