论文部分内容阅读
理论研究部分，目的：旨在从“浊邪”在脑中异常堆积导致阿尔茨海默病(Alzheimer disease，AD)的角度探讨该病的发病机制及防治方法，通过用中医理论逐条分析AD的症状，分析脑的生理病理特点，阐明AD病位在脑，与脾胃关系密切，探讨脾胃与AD的关系，最终得出健脾益智法可以通过脾胃的功能改善浊邪在脑中的异常堆积状况，达到治疗AD的理论依据。方法：回顾和总结了中医学对于AD相关症状的记载与认识，将中医理论的认知过程与AD认知衰退量表相结合，利用解剖学和中医传统理论结合，梳理脑与五脏的关联及脑的生理病理特点，归纳和分析脾胃与AD的内在联系，结合健脾益智汤组方分析及导师团队前期研究，为健脾益智法从祛浊角度治疗AD提供了理论依据。结果：在中医理论系统中，AD病名虽未被直接提出，但AD的症状都有相关描述，AD的认知衰退量表GDS与《内经》中描述的认知过程密切相关，病位在脑的原因与脑的生理病理特性相关，其发病与五脏皆有联系，但脾胃功能失常是其根本的病因。无论是从脾胃是后天之本，负责保障其他脏腑的正常生理功能运行，或是脾胃自身的主运化，主升清降浊的功能，亦或者现代的实验或临床研究，都可为从脾胃论治AD提供详实的依据。健脾益智汤从认知衰退过程，脑的病理特性论治AD，以健脾益气，升清降浊为基本治法，在基础和临床研究中均表现出较好的疗效，健脾益智汤中所含药物也对AD有着有益的成分，可以发挥联合靶向作用，提高疗效。
实验研究部分，目的：通过构建AD大鼠模型，采用行为学、脲酶法、聚合酶链式反应、酶联免疫吸附剂测定法、蛋白检测法，旨在观察和分析健脾益智汤对模型大鼠学习记忆能力、脑内尿素含量、相关尿素转运蛋白及基因、尿素循环相关酶指标的影响，探讨和分析健脾益智汤对改善模型大鼠学习记忆能力的影响，及可能机制。方法：采用SPF级雄性SD大鼠随机分为对照组、假手术组、模型组、健脾益智汤组、吡拉西坦组。采用海马区注射Aβ1-40的方法制备AD实验动物模型。各组术后第2周起开始灌胃，分别持续7天，14天，28天，14.4ml/kg/d，每日1次，西药组给与吡拉西坦，加生理盐水制成混悬液，14.4ml/kg/d，每日一次，其余各组给予同等剂量的生理盐水。采用Morris水迷宫评价各组大鼠学习记忆能力，观察和探健脾益智法对模型大鼠学习记忆的影响。采用脲酶法观察和分析各组大鼠脑内尿素含量，实时荧光定量PCR法检测SLC14A1基因mRNA表达情况，Westernblot法检测UTB蛋白含量，ELISA法检测尿素循环相关酶ARG、OTC、CPS、ASS、ASL含量，从尿素代谢角度探讨健脾益智汤改善模型大鼠学习记忆障碍的可能机制。结果：1.Morris水迷宫：在治疗7天、14天、28天组中，模型组定位航行逃避潜伏期明显延长，空间探索实验穿台次数明显减少，目标象限探索时间明显减低，与对照组比较，有显著性差异(P＜0.01)；与模型组相比，健脾益智汤组与吡拉西坦组逃避潜伏期及穿台次数明显增多(P＜0.01或P＜0.05)，且健脾益智汤组的改善效果随着治疗天数的增加而有所增强。2脲酶法检测：在治疗7天、14天、28天组中，模型组脑内尿素含量明显增加，与对照组比较，有显著性差异(P＜0.01)；与模型组相比，健脾益智汤组与吡拉西坦组可有效降低大鼠脑内尿素含量(P＜0.01或P＜0.05)，且健脾益智汤组的改善效果随着治疗天数的增加而有所增强。3.实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法检测：在治疗7天、14天、28天组中，与对照组比较，模型组脑内SLC14A1基因mRNA相对表达水平与UTB蛋白含量均有明显降低(P＜0.01)。在治疗7天组中，与模型组相比，健脾益智汤组与吡拉西坦组对SLC14A1和UTB均无统计学意义上的差异(P＞0.05)。在14天组和28天组中，健脾益智汤组与吡拉西坦组相比于模型组，均能一定程度的升高SLC14A1mRNA相对表达水平和UTB蛋白含量(P＜0.05或P＜0.01)。通过对7天，14天和28天不同时间节点的各组大鼠脑内SLC14A1mRNA比较，可发现各组均无显著升高或降低，差异无统计学意义(P＞0.05)，而对比UTB含量，治疗28天的健脾益智汤组和吡拉西坦组均比治疗7天时升高更多(P＜0.05)。4.酶联免疫吸附检测：在治疗7天、14天、28天组中，与对照组比较，模型组脑内ARG、ASS含量均有明显升高(P＜0.01或P＜0.05)，ASL含量有所下降，但无统计学意义。与模型组相比，在治疗7天时，健脾益智汤组与吡拉西坦组ARG、ASS含量有所下降，ASL含量有所升高，但无统计学意义(P＞0.05)；在治疗14天和28天时，健脾益智汤组与吡拉西坦组ARG、ASS含量明显下降(P＜0.01或P＜0.05)，ASL含量有所上升，但无统计学意义(P＞0.05)。通过对7天，14天和28天不同时间节点的各组大鼠脑内ARG、ASS、ASL含量比较，可发现对照组，假手术组，模型组均无显著升高或降低(P＞0.05)，健脾益智汤组和吡拉西坦组均有随着治疗时间增加而降低效果更佳，但差异无统计学意义(P＞0.05)。
结论：1.AD各症状在中医理论中均有描述，评价AD认知功能的认识衰退量表GDS与《内经》中认知过程各阶段相吻合，AD的病位在脑，脑因其独特的生理病理特点，与五脏的功能密切相关，而五脏的正常运行又赖于后天之本脾胃，故在防治AD时，应重视脾胃的调节。2.浊邪阻滞是AD发病的重要病机，脑内过量尿素的堆积是浊邪的一种，脾胃主升清降浊，从脾胃论治AD有据可依，健脾益智汤可通过组方药物的协同作用，调节脾胃功能，使清浊升降相因，对AD发挥整体治疗效果。3.大鼠颅内海马区注射Aβ1-40造模方式成功构建了AD模型，健脾益智汤可有效改善AD大鼠学习记忆能力；4.模型大鼠出现脑内尿素含量升高，健脾益智汤可能通过上调SLC14A1基因和UTB蛋白表达，提高尿素转运能力，或是通过下调ARG、ASS酶活性，使尿素生成减少或降低炎症细胞因子的表达水平而达到改善学习记忆障碍的作用。5.健脾益智汤对AD模型大鼠的行为学及脑内尿素水平改善与用药时间正相关，故通过健脾胃而益智需要一定的服药周期。
实验研究部分，目的：通过构建AD大鼠模型，采用行为学、脲酶法、聚合酶链式反应、酶联免疫吸附剂测定法、蛋白检测法，旨在观察和分析健脾益智汤对模型大鼠学习记忆能力、脑内尿素含量、相关尿素转运蛋白及基因、尿素循环相关酶指标的影响，探讨和分析健脾益智汤对改善模型大鼠学习记忆能力的影响，及可能机制。方法：采用SPF级雄性SD大鼠随机分为对照组、假手术组、模型组、健脾益智汤组、吡拉西坦组。采用海马区注射Aβ1-40的方法制备AD实验动物模型。各组术后第2周起开始灌胃，分别持续7天，14天，28天，14.4ml/kg/d，每日1次，西药组给与吡拉西坦，加生理盐水制成混悬液，14.4ml/kg/d，每日一次，其余各组给予同等剂量的生理盐水。采用Morris水迷宫评价各组大鼠学习记忆能力，观察和探健脾益智法对模型大鼠学习记忆的影响。采用脲酶法观察和分析各组大鼠脑内尿素含量，实时荧光定量PCR法检测SLC14A1基因mRNA表达情况，Westernblot法检测UTB蛋白含量，ELISA法检测尿素循环相关酶ARG、OTC、CPS、ASS、ASL含量，从尿素代谢角度探讨健脾益智汤改善模型大鼠学习记忆障碍的可能机制。结果：1.Morris水迷宫：在治疗7天、14天、28天组中，模型组定位航行逃避潜伏期明显延长，空间探索实验穿台次数明显减少，目标象限探索时间明显减低，与对照组比较，有显著性差异(P＜0.01)；与模型组相比，健脾益智汤组与吡拉西坦组逃避潜伏期及穿台次数明显增多(P＜0.01或P＜0.05)，且健脾益智汤组的改善效果随着治疗天数的增加而有所增强。2脲酶法检测：在治疗7天、14天、28天组中，模型组脑内尿素含量明显增加，与对照组比较，有显著性差异(P＜0.01)；与模型组相比，健脾益智汤组与吡拉西坦组可有效降低大鼠脑内尿素含量(P＜0.01或P＜0.05)，且健脾益智汤组的改善效果随着治疗天数的增加而有所增强。3.实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法检测：在治疗7天、14天、28天组中，与对照组比较，模型组脑内SLC14A1基因mRNA相对表达水平与UTB蛋白含量均有明显降低(P＜0.01)。在治疗7天组中，与模型组相比，健脾益智汤组与吡拉西坦组对SLC14A1和UTB均无统计学意义上的差异(P＞0.05)。在14天组和28天组中，健脾益智汤组与吡拉西坦组相比于模型组，均能一定程度的升高SLC14A1mRNA相对表达水平和UTB蛋白含量(P＜0.05或P＜0.01)。通过对7天，14天和28天不同时间节点的各组大鼠脑内SLC14A1mRNA比较，可发现各组均无显著升高或降低，差异无统计学意义(P＞0.05)，而对比UTB含量，治疗28天的健脾益智汤组和吡拉西坦组均比治疗7天时升高更多(P＜0.05)。4.酶联免疫吸附检测：在治疗7天、14天、28天组中，与对照组比较，模型组脑内ARG、ASS含量均有明显升高(P＜0.01或P＜0.05)，ASL含量有所下降，但无统计学意义。与模型组相比，在治疗7天时，健脾益智汤组与吡拉西坦组ARG、ASS含量有所下降，ASL含量有所升高，但无统计学意义(P＞0.05)；在治疗14天和28天时，健脾益智汤组与吡拉西坦组ARG、ASS含量明显下降(P＜0.01或P＜0.05)，ASL含量有所上升，但无统计学意义(P＞0.05)。通过对7天，14天和28天不同时间节点的各组大鼠脑内ARG、ASS、ASL含量比较，可发现对照组，假手术组，模型组均无显著升高或降低(P＞0.05)，健脾益智汤组和吡拉西坦组均有随着治疗时间增加而降低效果更佳，但差异无统计学意义(P＞0.05)。
结论：1.AD各症状在中医理论中均有描述，评价AD认知功能的认识衰退量表GDS与《内经》中认知过程各阶段相吻合，AD的病位在脑，脑因其独特的生理病理特点，与五脏的功能密切相关，而五脏的正常运行又赖于后天之本脾胃，故在防治AD时，应重视脾胃的调节。2.浊邪阻滞是AD发病的重要病机，脑内过量尿素的堆积是浊邪的一种，脾胃主升清降浊，从脾胃论治AD有据可依，健脾益智汤可通过组方药物的协同作用，调节脾胃功能，使清浊升降相因，对AD发挥整体治疗效果。3.大鼠颅内海马区注射Aβ1-40造模方式成功构建了AD模型，健脾益智汤可有效改善AD大鼠学习记忆能力；4.模型大鼠出现脑内尿素含量升高，健脾益智汤可能通过上调SLC14A1基因和UTB蛋白表达，提高尿素转运能力，或是通过下调ARG、ASS酶活性，使尿素生成减少或降低炎症细胞因子的表达水平而达到改善学习记忆障碍的作用。5.健脾益智汤对AD模型大鼠的行为学及脑内尿素水平改善与用药时间正相关，故通过健脾胃而益智需要一定的服药周期。