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本文研究了雌激素对AD大鼠和去卵巢大鼠学习记忆的影响及作用机制。本研究分为三个部分:
第一部分:AD大鼠模型的建立及Aβ对其行为、病理及tau蛋白磷酸化水平的影响。
目的:研究海马区内注射β-淀粉样蛋白(Aβ)的神经毒性,并对应用此方法建立的阿尔茨海默病(AD)动物模型进行评价。
方法:选取雌性成年SD大鼠24只,随机分为正常对照组、生理盐水组、AD组,每组8只。AD组予以海马CA1内注射Aβ25-35建立AD模型。Morris水迷宫检测大鼠学习记忆功能;HE染色及Bielschowski染色法观察海马神经元形态;免疫组化法观察tau蛋白异常磷酸化变化。
结果:AD组大鼠Morris水迷宫测试结果较正常对照组明显减退(P<0.01);海马CA1区神经元纤维形态与正常对照组相比较紊乱;海马CA1区tau蛋白磷酸化阳性细胞数明显多于正常对照组(P<0.01)。
结论:海马内注射凝集态Aβ25-35可产生神经毒性作用,能较好地模拟AD行为和病理表现,可作为AD模型之一。Aβ的神经毒性可能是通过tau蛋白的异常磷酸化起作用。
第二部分:雌激素对AD大鼠学习记忆及神经元保护作用的研究。
目的:观察雌激素干预对AD大鼠学习记忆及海马神经元损伤的作用,探讨雌激素神经保护作用的可能机制。
方法:选取雌性成年SD大鼠24只,随机分为正常对照组、AD+E2组、AD组,每组8只。AD+E2组于注射Aβ2周后予以雌激素干预。Morris水迷宫检测大鼠学习记忆功能,HE染色及Bielschowski染色法观察海马神经元形态,免疫组化法观察tau蛋白异常磷酸化变化及GSK-3β活性。
结果:AD+E2组大鼠Morris水迷宫测试明显优于AD组(P<0.01);海马CA1区神经元纤维形态较AD组规则;海马CA1区tau蛋白磷酸化阳性细胞数明显少于AD组(P<0.01);免疫印迹显示,与AD组相比,AD+E2组海马神经元tau蛋白表达减少,且GSK-3β总量及磷酸化GSK-3β含量均有所增加。
结论:雌激素治疗可改善Aβ诱导的学习记忆障碍及海马神经元损伤,且可降低海马神经元tau蛋白过度磷酸化水平,可能通过作用于GSK-3β导致tau蛋白去磷酸化,从而达到神经保护的目的。
第三部分:雌激素对去卵巢大鼠海马神经元保护作用的研究。
目的:研究雌激素替代治疗对去卵巢大鼠学习记忆及神经元损伤的保护作用。
方法:选取雌性成年SD大鼠24只,随机分为正常对照组、OVX+E2组、OVX组,每组8只。去势术4周后予以雌激素替代治疗。Morris水迷宫检测大鼠学习记忆功能,HE染色及Bielschowski染色法观察海马神经元形态,免疫组化法观察tau蛋白异常磷酸化变化。
结果:OVX+E2组大鼠Morris水迷宫测试明显优于OVX组(P<0.05);海马CA1区神经元纤维形态较OVX组规则;海马CA1区tau蛋白磷酸化阳性细胞数明显少于OVX组(P<0.05)。
结论:切除雌性大鼠卵巢导致雌激素缺乏可引起大鼠学习记忆功能障碍、海马CA1区神经元损伤及tau蛋白磷酸化变化,而雌激素替代治疗对此有改善作用。