[背景和目的] 耐药是白血病化疗失败的主要原因。多药耐药基因mdrl编码的跨膜糖蛋白P-gp能将不同结构的化疗药物泵出细胞,导致耐药,造成白血病难治和复发。目前临床逆转耐药的药物钙通道阻滞剂、环孢素A、抗生素、酶类抑制剂等从蛋白质水平,通过阻断P-gp的通道作用或降低细胞内解毒酶类的活性从而逆转耐药,这些药物的有效逆转耐药剂量通常远远超出其毒性最小剂量,应用时的毒副作用严重,限制临床使用。新药物的寻找和开发迫在眉睫。 RNA干扰是使转录后基因沉默的有力武器,是广泛存在于机体的内源的、自然的途径,因其能高效特异催化切割靶mRNA,使转录后基因表达下调,成为肿瘤和病毒性疾病基因治疗药物开发热点。研究证明,RNA干扰较其它反义技术能更好的下调胞浆mRNA表达,而且RNAi可以通过构建表达载体,长期沉默靶基因,并通过特异性启动子来调控其在不同组织的表达。 另外,研究耐药的逆转,尚需寻找合理的研究对象。目前对肿瘤耐药的体外研究所用的细胞株多为药物持续诱导产生,耐药性状不稳定,在基因治疗逆转耐药的研究中不能精确反应逆转因素的作用。 基于以上研究现状,我们针对三条mdrlmRNA靶序列构建了四条抗mdrlRNA干扰真核表达载体,以期逆转mdrl所致耐药;将mdrl全长