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第一部分MiR-29c在膀胱癌组织中表达降低 目的:miR-29c在膀胱癌组织及癌旁组织中的差异表达及其与临床各病理参数的关系。 方法:利用实时荧光定量PCR检测30例膀胱癌组织及癌旁组织中miR-29c的表达;Ta期:5例，T1期:15例，T2-4期:10例，参照miR-29c在膀胱癌组织中表达的中位数(0.3496)，将其分为2组:低表达组15例和高表达组15例，分析其与临床各病理参数之间的关系 结果:膀胱癌组织中miR-29c表达量明显低于癌旁组织(P＜0.01)，miR-29c低表达与肿瘤的分期有关(P＜0.01)。 结论:MiR-29c在膀胱癌组织中表达下调，可能与膀胱癌的分期有关。 第二部分 MicroRNA-29a和microRNA-29c腺病毒构建及鉴定 目的:构建miRNA-29a/c的重组腺病毒并在膀胱癌T24细胞中坚定。 方法:以人全基因组DNA为模板，PCR扩增miR-29a、miR-29c，克隆至腺病毒穿梭载体pAdtrace-TO4-CMV。重组穿梭载体经pmeⅠ线性化后与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化感受态大肠杆菌BJ5183，通过同源重组获得重组腺病毒质粒pAdEasy-1-miR-29a、pAdEasy-1-miR-29c，pacⅠ线性化后转染HEK-293细胞，进行包装和扩增。实时荧光定量PCR检测感染腺病毒的膀胱癌T24细胞中miR-29a、miR-29c的表达水平。 结果:经DNA测序和限制性内切酶分析显示，重组腺病毒质粒pAdEasy-1-miR-29a、pAdEasy-1-miR-29c构建成功;感染腺病毒Ad-miR-29a和Ad-miR-29c后，经实时荧光定量PCR检测，膀胱癌细胞中miR-29a、miR-29c表达显著增高(P＜0.01)。 结论:已成功构建miR-29a、miR-29c腺病毒，为研究其在膀胱癌细胞的生物学功能奠定基础。 第三部分 MiR-29c在膀胱癌细胞中的生物学功能及其抑制增殖的机制 目的:体外研究miR-29c生物学作用及其抑制膀胱移形细胞癌增殖的分子机制。 方法:用CCK-8检测T24细胞增殖能力，FCM检测T24细胞周期分布及细胞凋亡，transwell实验检测细胞的迁移能力。Western blot检测AKT/GSK3β通路中增殖相关蛋白的表达。 结果:过表达miR-29c显著抑制膀胱癌细胞T24的增殖(P＜0.01)、迁移(P＜0.05)，T24细胞阻滞于G0/G1期(P＜0.01)并能促进细胞凋亡(P＜0.01).Western blot结果显示:与对照组相比过表达miR-29c组中c-myc蛋白表达量显著降低(P＜0.01);而cyclinD1蛋白的表达则无明显变化。miR-29c+LY294002组比单独使用miR-29c组和LY294002组p-AKT和p-GSK3β蛋白表达显著降低(P＜0.01) 结论:miR-29c可能通过AKT-GSK3βpathway抑制T24细胞的增殖，其在膀胱癌的发展中起着重要的作用。