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目的:观察三种不同fimA基因型P.gingivalis-LPS对HUVEC产生致炎细胞因子、趋化因子以及黏附分子的影响,初步探讨P.gingivalis感染在AS发生和发展的可能作用以及作为牙周炎与AS相关的物质基础的可能。方法:厌氧培养ⅠfimA型(ATCC 33277)、ⅡfimA型(WCSP115)、ⅣfimA型(W83)P.gingivalis,采用热酚-水法提取P.gingivalis-LPS,应用SDS-PAGE+银染、红外线光谱分析、鲎试验对提取的脂多糖予以鉴定;体外培养HUVEC,待HUVEC单层融合后,分别加入不同终浓度的P.gingivalis-LPS,共同培养2h、6h、24h,应用ELISA法测定培养上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-8和MCP-1的分泌量;提取HUVEC总RNA, RT-PCR法检测IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-8、MCP-1、ICAM-1和VCAM-1 mRNA表达水平,FCM技术检测HUVEC表面ICAM-1和VCAM-1蛋白表达量。结果:(1)本实验研究条件下所提取的P.gingivalis细菌物质经红外光谱分析和SDS-PAGE电泳分析,表明其结构与Ecoli-LPS相似,系P.gingivalis-LPS,鲎试验表明所提取的P.gingivalis-LPS具有较高的生物学活性(≥15ng/ml),可用于后续的实验。(2)3型P.gingivalis-LPS作用于HUVEC后,细胞表达IL-1β蛋白水平及mRNA水平升高,在较高浓度(5、10μg/ml)时,Ⅱ型fimA P.gingivalis-LPS刺激HUVEC IL-1β蛋白水平及mRNA的表达强于Ⅰ型fimA P.gingivalis-LPS。在3型P.gingivalis-LPS刺激下,HUVEC IL-6水平的升高发生在转录mRNA水平和转录后蛋白水平,且存在着浓度依赖效应;不同fimA基因型P.gingivalis-LPS刺激作用存在着差异。在蛋白水平上,Ⅱ型和Ⅳ型fimA基因型P.gingivalis-LPS刺激作用强于Ⅰ型fimA基因型P.gingivalis-LPS,但上调作用出现较晚。在mRNA水平上,Ⅱ型fimA基因型P.gingivalis-LPS刺激HUVEC表达IL-6 mRNA的作用较强。在3型P.gingivalis-LPS刺激下,HUVEC TNF-α蛋白水平及mRNA的表达量上调,且存在着浓度依赖效应,蛋白水平在24h时表达量达到高峰。在一些浓度下,Ⅱ型fimAP.gingivalis-LPS刺激HUVEC TNF-α蛋白水平比Ⅳ型fimA P.gingivalis-LPS的作用强。在mRNA水平上,高浓度(5、10μg/ml)时,Ⅱ型fimA基因型P.gingivalis-LPS具有较强的刺激HUVEC表达TNF-αmRNA的作用。提示3型P.gingivalis-LPS对HUVEC表达IL-1β、IL-6和TNF-α的调节发生在转录和转录后两个水平,从而导致血管内皮细胞功能紊乱,可能在AS的进程中起到关键的作用,且fimA基因型的差异可能导致Rgingivalis-LPS在调控HUVEC产生致炎细胞因子的能力存在差异。(3)本实验研究条件下,应用3型P.gingivalis-LPS刺激HUVEC后细胞表达IL-8蛋白水平和mRNA的水平升高,且存在着浓度依赖效应。mRNA水平6h时达到高峰,蛋白水平24h时分泌量达到高峰。3型P.gingivalis-LPS间刺激HUVEC表达IL-8蛋白水平差异无统计学意义(p>0.05)。6h时,5μg/ml浓度Ⅱ型fimA基因型P.gingivalis-LPS较强刺激HUVEC表达IL-8mRNA的作用(p<0.05)。在3型P.gingivalis-LPS刺激下,HUVEC MCP-1的升高发生在转录mRNA水平和转录后蛋白水平,且存在着浓度依赖效应,mRNA水平在6h时达到高峰,24h时恢复到正常水平;蛋白水平在24h时达到高峰。Ⅰ型fimA基因型P.gingivalis-LPS刺激HUVEC MCP-1的蛋白表达强于Ⅱ型fimA基因型P.gingivalis-LPS。提示P.gingivalis-LPS诱导HUVEC产生趋化因子的作用可能在AS进程中发挥作用。fimA基因型的差异可能导致P.gingivalis-LPS诱导HUVEC表达MCP.1的能力存在着差异。(4)本实验研究条件下,P.gingivalis-LPS刺激HUVEC后表达VCAM-1 mRNA与阴性对照组比较,差异无统计学意义(p>0.05);在6h时,较高浓度的(5、10μg/ml)Ⅰ型和Ⅱ型fimA基因型P.gingivalis-LPS刺激HUVEC表达ICAM-1 mRNA表达增加,Ⅱ型fimA基因型P.gingivalis-LPS这种上调作用强于Ⅰ型和Ⅳ型fimA P.gingivalis-LPS;但在蛋白水平上,本实验条件下未能检测到VCAM-1和ICAM-1蛋白水平的升高。提示较高浓度下,P.gingivalis-LPS可刺激HUVEC表达ICAM-1mRNA的水平上调,P.gingivalis-LPS对HUVEC产生VCAM-1mRNA的作用不明显。结论:3型P.gingivalis-LPS均能刺激HUVEC表达致炎细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α,趋化因子IL-8和MCP-1,而且使黏附分子ICAM-1mRNA转录水平升高。不同fimA基因型P.gingivalis-LPS对HUVEC功能的影响存在着差异。提示P.gingivalis感染可引起内皮细胞活化和功能紊乱,从而引发内皮细胞的炎症反应,可能在AS的发生和发展过程中发挥关键作用。