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本文主要分为以下几个部分: 第一部分:小鼠早期胚胎发育中肥大细胞主要起源于E7.5卵黄囊 尽管成年小鼠骨髓中肥大细胞起源及分化已经研究的比较清楚,但是关于胚胎期肥大细胞起源及分化的研究还不清楚。早在80年代初研究者已经通过有限稀释法证明:胚胎期的卵黄囊、胎肝、皮肤中都存在肥大细胞的前体。但是卵黄囊或胎肝中的肥大细胞前体是否可发育为胚胎期的肥大细胞,这些前体对成体各组织中肥大细胞的贡献又是怎样,还没有明确的研究。 为此,本研究利用Avidin特异性结合肥大细胞颗粒这一特性分析了小鼠胚胎期肥大细胞的发育。结果显示,直到E16.5天小鼠各组织中出现Avidin阳性的肥大细胞,流式分析表明T1/ST2可以和c-Kit一起作为区分胚胎早期肥大细胞的标记。并且通过E12.5胚胎内注射同期胎肝细胞,证实了小鼠E12.5胎肝中的肥大细胞前体可发育为各组织中的肥大细胞。通过Csflr-iCre命运-示踪系统,我们证实了:E7.5卵黄囊产生的早期EMPs,在E10.5之前迁移并定居至胎肝,在胎肝中分化出肥大细胞前体:CD45+CD11b-CD117+ Integrinβ7hi,该前体迁移至外周发育为成熟的肥大细胞。 虽然,成体c-Kit W-sh/W-sh小鼠各组织中缺少肥大细胞,但在c-Kit W-sh/W-sh小鼠胚胎期E16.5各组织中都可以检测到肥大细胞,可见c-Kit基因发生W-sh/W-sh突变不影响胚胎期肥大细胞的发育。此外,在T/B联合免疫缺陷的Rag2基因缺陷小鼠的胚胎期以及成体各组织中,肥大细胞的发育正常,表明胚胎期肥大细胞的发育以及后期骨髓来源的肥大细胞的发育都不依赖于Rag2基因。 小鼠胚胎期形成的肥大细胞在出生后继续发育成熟,获得FcεRI和Sca1的表达。皮肤和腹腔中胚胎期形成的肥大细胞在出生后能够自我更新,很少依赖于永久造血。 第二部分:腹腔肥大细胞快速分泌CXCL1的效应依赖于巨噬细胞的辅助 近年来肥大细胞在天然免疫中的作用越来越受到研究者的关注。肥大细胞不仅在过敏反应的效应阶段通过IgE交联,脱颗粒释放大量的过敏介质,也可以通过TLR被活化,这种活化方式主要介导炎性细胞因子的分泌。 已有的研究发现,肥大细胞是天然免疫应答早期快速分泌趋化因子CXCL1,招募中性粒细胞的主要来源,在时程上早于巨噬细胞。在此基础上,我们研究发现,TLR触发肥大细胞快速分泌CXCL1这一效应依赖于组织定居的巨噬细胞的辅助作用。这种辅助作用依赖于Mφ与肥大细胞的细胞接触。虽然,我们目前的研究尚未找出存在于辅助细胞、控制肥大细胞分泌CXCL1的关键分子,但该分子的表达依赖于依赖RNA从头合成和ERK的磷酸化。 此外,只有成熟的肥大细胞才具备对LM、LPS等刺激,产生CXCL1的能力。肥大细胞快速分泌的CXCL1不依赖于肥大细胞中RNA的从头合成,因为成熟的组织肥大细胞中预存大量的CXCL1mRNA。肥大细胞的成熟,依赖于组织微环境。体外培养的骨髓来源的肥大细胞(BMMC)在注射入小鼠的腹腔后,会逐渐成熟,获得对LM、LPS刺激分泌CXCL1的能力;然而,同期在体外与3T3共培养的BMMC,对LM、LPS等刺激依然无应答。此外,将腹腔肥大细胞体外扩增培养后,渐渐失去分泌CXCL1的能力。 综上,腹腔肥大细胞快速合成分泌CXCL1依赖于巨噬细胞的接触辅助,同时依赖于自身的发育成熟。