大鼠骨髓间充质干细胞在视网膜色素变性大鼠体内分化的实验研究

来源 :中国协和医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:gwang903
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目的研究体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)视网膜下移植后在视网膜色素变性模型鼠内微环境中的存活、分化情况。方法采用贴壁筛选法体外分离、培养Lewis大鼠MSCs,并经流式细胞仪鉴定CD90(+)CD45(-)后,用Brdu进行标记。用3%NaIO3100mg/Kg对Lewis鼠进行腹腔注射后建立视网膜色素变性模型,并经病理切片证实视网膜色素上皮细胞(Retinal Pigment Epithelium RPE)及视网膜光感受器细胞破坏。将25只大鼠随机分为5组,每组5只。每只大鼠的右眼为实验眼,在睫状体平部穿刺,经玻璃体腔进入视网膜下腔注射MSCs悬液,左眼作为对照眼,视网膜下腔注射等量PBS液。术后1,2,3,4,5周分别处死一组动物,摘除眼球行冰冻病理切片后分别用小鼠抗人BrdU单抗、FITC标记羊抗小鼠二抗和小鼠抗大鼠Rhodopsin单抗、小鼠抗大鼠全角蛋白(Pan-cytokeratin,PCK)单抗、Cy3标记羊抗小鼠二抗双重荧光标记。观察术后1,2,3,4,5周MSCs在视网膜色素变性微环境中的存活、分化情况。结果视网膜下移植术后第1周即可见MSCs位于视网膜色素上皮层和光感受器细胞层,第1与第2周MSCs的Rhodopsin标记和全角蛋白(Pan-cytokeratin,PCK)标记阴性,第3-5周可见MSCs Rhodopsin标记和全角蛋白(PCK)标记阳性。结果初步表明,实验组视网膜下移植的MSCs后可以表达视网膜色素上皮细胞和光感受器细胞的表面抗原。结论MSCs移植于视网膜色素变性大鼠的视网膜下腔后,分布于视网膜色素上皮层和光感受器细胞层。第1-2周MSCs细胞不表达Rhodopsin和全角蛋白(PCK),即尚未向RPE细胞和光感受器细胞方向分化。自第3-5周可见MSCs向RPE细胞和光感受器细胞方向分化。
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