构建人泛素连接酶Cbl-b基因短发卡RNA（shRNA）重组慢病毒载体，探讨其对人黑素瘤A375细胞生物学行为的影响。
方法设计并合成3条沉默Cbl-b基因的特异性shRNA及1条阴性对照shRNA，构建慢病毒载体。将A375细胞分成5组，即分别用3条特异性shRNA转染的CBLB-shRNA-1组、CBLB-shRNA-2组、CBLB-shRNA-3组，阴性对照组（阴性对照shRNA转染），空白对照组（转染空载体）。应用实时荧光定量PCR和Western印迹检测转染后72 h各组A375细胞沉默效率；CCK8法检测转染后24、48、72及96 h细胞增殖能力；流式细胞仪检测转染后72 h细胞凋亡情况、细胞周期，Transwell法检测转染后72 h细胞侵袭能力。
结果成功构建3条Cbl-b shRNA慢病毒载体，Western印迹示CBLB-shRNA-3蛋白沉默效率最高。CCK8检测表明，CBLB-shRNA-3组A375细胞增殖能力在转染后72 h和96 h较阴性对照组、空白对照组明显降低（均P < 0.01）。流式细胞仪检测示，CBLB-shRNA-3组凋亡率[（22.73 ± 6.58）%]明显高于阴性对照组[（6.08 ± 1.35）%]和空白对照组[（6.34 ± 1.07）%，均P < 0.01]。CBLB-shRNA-3组G1期细胞比例明显高于阴性对照组和空白对照组（P < 0.01），而S期细胞比例明显低于阴性对照组和空白对照组（P < 0.01）。Transwell检测示，阴性对照组、空白对照组和CBLB-shRNA-3组转染后72 h时穿膜细胞数分别为76.60 ± 1.82、73.20 ± 3.83、19.60 ± 1.14，差异有统计学意义（F = 794.50，P < 0.01）。
结论成功构建能高效沉默Cbl-b蛋白的CBLB-shRNA-3重组shRNA慢病毒载体，其可促进A375细胞凋亡，抑制A375细胞增殖、细胞周期进程和侵袭能力。