探讨局部移植同种异体脂肪源性间充质干细胞(ADSCs)对大鼠皮肤创面巨噬细胞表型的影响。
方法将冻存的原代SD大鼠ADSCs复苏并进行传代培养，取生长良好的第3代细胞进行实验。36只SD大鼠在背部脊柱两侧建立全层皮肤缺损创面。按随机数字表法分为ADSCs组(18只)和对照组(18只)。造模后ADSCs组创面皮下环形注射0.2 ml经活细胞染色剂氯甲基－1，1'－双十八烷基－3，3，3'，3'－四甲基－吲哚－羰花青－高氯酸盐(CM－Dil)标记的ADSCs悬液(浓度为5×106个/ml)；对照组分别予以无血清杜尔伯科改良伊格尔培养基(DMEM)0.2 ml环形注射于创面周围皮下。伤后3，7，14 d，各组每个时相点分别取6只大鼠，测量创面面积并计算愈合率；切取创面组织，HE染色观察组织形态；免疫组化染色观察创面皮肤白细胞介素－10(IL－10)表达情况；伤后14 d，倒置荧光显微镜下观察CM－Dil标记的ADSCs在创面组织中的分布情况；免疫荧光染色观察白细胞分化抗原68(CD68)与诱导型一氧化氮合酶(iNOS)双阳性(M1型巨噬细胞)和CD68与精氨酸酶1(Arg－1)双阳性(M2型巨噬细胞)的表达情况。
结果(1)伤后3 d，ADSCs组与对照组创面见血痂皮覆盖，周围稍红肿，愈合率相差较大(P<0.01)；伤后7 d，ADSCs组与对照组创面均明显减小，ADSCs组创面愈合速度明显快于对照组，ADSCs组创面愈合率明显高于对照组(P<0.01)；伤后14 d，ADSCs组创面基本完全愈合，愈合率接近99%(P<0.01)，且ADSCs组的创面愈合皮肤组织质地优于对照组。(2)伤后3 d，两组创面均有大量炎性细胞出现，胶原纤维排列均紊乱，无明显差异；伤后7 d，ADSCs组创面炎性细胞浸润相对于对照组减少，对照组胶原纤维相对杂乱；伤后14 d，ADSCs组与对照组创面炎性细胞均明显减少，ADSCs组新生血管数量较对照组多，ADSCs组胶原纤维相对于对照组排列更加整齐、规则。ADSCs组创面愈合组织可见CM－Dil标记的ADSCs；对照组未见CM－Dil标记的ADSCs。(3)伤后3 d，ADSCs组与对照组创面M1型巨噬细胞分布差异不大，ADSCs组M2型巨噬细胞数量明显比对照组多(P<0.01)，IL－10的表达量不高且两组差异不大；伤后7，14 d，ADSCs组M1型巨噬细胞数明显较对照组少，而M2型巨噬细胞数较对照组明显增多(P<0.01)，ADSCs组IL－10表达量均明显高于对照组(P<0.01)。
结论同种异体ADSCs局部移植可以促进M1型巨噬细胞向M2型巨噬细胞转化，促进皮肤缺损创面的再生愈合。