【摘 要】
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目的 建立促奶牛卵泡超数同步发育的方法,并利用体细胞核移植和分子技术评价来自这些卵泡的卵母细胞发育潜能.方法 用E2-P4对淘汰的高产奶牛进行联合处理后,分别对其实施不同
【机 构】
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同济大学生命科学与技术学院,上海,200092上海转基因研究中心,上海,201203;同济大学生命科学与技术学院,上海,200092;上海转基因研究中心,上海,201203;上海交通大学医学院附属瑞金
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目的 建立促奶牛卵泡超数同步发育的方法,并利用体细胞核移植和分子技术评价来自这些卵泡的卵母细胞发育潜能.方法 用E2-P4对淘汰的高产奶牛进行联合处理后,分别对其实施不同组合的外源促性腺激素处理 [FSH 12 h组,FSH 48 h组,FSH 48 h-LH 6 h组(简称LH 6 h组),FSH48 h-LH 26 h组(简称LH 26 h组)] 以促进其卵泡超数同步发育;然后从卵泡中回收COCs进行体外成熟,排放第一极体的卵供作优质种牛的体细胞核转移(nuclear transfer,NT)受体,以评价卵的发育潜能.结果 E2-P4能成功地诱导奶牛卵巢中产生一个新的卵泡起始波,并能保证卵泡在外源促性腺激素作用下实现超数同步发育;上述四组不同组合外源促性腺激素处理的卵母细胞衍生的NT重构胚经体内培养7 d后,后3组的囊胚发育率显著高于FSH 12 h组和对照组(P<0.01);将这些克隆囊胚移植同步发情的受体牛子宫后,仅LH 26 h组的卵所获得的克隆胚能实现全程发育(直至克隆小牛出生).经RT-PCR分析颗粒细胞中FSHr、LHr 和连接蛋白43(Connexin 43,Cx 43)等mRNA含量变化,以及Western印迹分析其Bcl-2和Bax蛋白表达水平的变化,证实该组卵巢提供的同步发育卵泡为早期闭锁卵泡.结论 E2-P4-FSH48h-LH26h组合处理可人为调控牛卵泡的同步发育;处于早期闭锁状态卵泡的卵母细胞具备较高的发育潜能.
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