【摘 要】
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目的构建IFN-λ真核表达体系,检测IFN-λ基因在真核细胞中的表达,评估真核细胞表达IFN-λ的抗增殖和抗病毒生物学作用。方法从poly I∶C刺激的Hu H-7细胞mRNA中克隆IFN-λ1/2
【机 构】
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河北医科大学基础医学院免疫学教研室,河北医科大学第一医院细胞治疗实验室,河北医科大学第四医院乳腺疾病治疗中心,河北医科大学第一医院妇产科,河北医科大学第一医院内分泌科,河北医科大学流行病与卫生统计学教
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目的构建IFN-λ真核表达体系,检测IFN-λ基因在真核细胞中的表达,评估真核细胞表达IFN-λ的抗增殖和抗病毒生物学作用。方法从poly I∶C刺激的Hu H-7细胞mRNA中克隆IFN-λ1/2基因全长,并进行DNA基因测序;构建pc DNA3-IFN-λ1/2质粒,酶切鉴定,并将其转染COS-7细胞,应用Western印迹检测IFN-λ1/2在COS-7细胞中的表达。COS-7细胞表达的IFN-λ1/2作用于人食管癌YES5和T.Tn细胞株,CCK-8法检测癌细胞增殖,Western印迹检测凋亡蛋白caspase-3的活化,实时荧光定量PCR检测ISG15及Mx A抗病毒基因表达。结果经PCR、DNA测序和酶切鉴定,克隆的IFN-λ1/2基因与Gen Bank公布的序列一致,IFN-λ1/2基因序列正确构建入pc DNA3载体中;在pc DNA3-IFN-λ1/2转染的COS-7细胞中检测到IFN-λ1/2蛋白表达;其表达产物可诱导食管癌细胞增殖抑制、活化凋亡蛋白caspase-3,并且上调抗病毒ISG15及Mx A基因。结论建立了IFN-λ真核表达体系,即通过pc DNA3-IFN-λ1/2转染COS-7细胞实现了IFN-λ表达;经此体系表达的IFN-λ具有抗增殖、诱导凋亡及上调抗病毒基因表达的生物学作用;此体系的建立为IFN-λ的生物学功能研究和临床应用奠定了基础。
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