【摘 要】
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目的 探讨亚硫酸氢钠穿心莲内酯(ASB)对人肾小管上皮细胞HK-2的细胞毒性作用.方法 HK-2细胞在DMEM/F12培养液培养24 h后,在经ASB作用2h前,分别加入N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)10
【机 构】
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军事医学科学院毒物药物研究所,北京100850;兰州军区联勤部药品仪器检验所,甘肃兰州730050;军事医学科学院毒物药物研究所,北京,100850;兰州军区联勤部药品仪器检验所,甘肃兰州,73005
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目的 探讨亚硫酸氢钠穿心莲内酯(ASB)对人肾小管上皮细胞HK-2的细胞毒性作用.方法 HK-2细胞在DMEM/F12培养液培养24 h后,在经ASB作用2h前,分别加入N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)10 mmol· L-1、2-氨基-4(丁基磺酸亚氨)-丁酸(BSO)2 mmol· L-1及30 min前分别加入过氧化氢酶(CAT)1000 U· L-1、环孢素A (CsA)50 μmol·L-1,再经ASB作用24 h,MTT法检测细胞存活率;用酶标仪检测乳酸脱氢酶(LDH)和丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、还原型谷胱甘肽(GSH)、总ATP酶(T-ATP)活性;流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡、线粒体膜电位(MMP)和活性氧(ROS);Western蛋白质印迹法检测胱天蛋白酶酶原3、Bcl-2、Bax和细胞色素c(Cyt c)蛋白的表达.结果 ASB呈浓度依赖性地抑制HK-2细胞增殖,作用24和48 h后IC5o值分别为19.1±3.6和(11.6±3.9)g·L-1.ASB 20 9·L-1处理HK-2细胞24 h后,G2/M期细胞由对照组的(23.3±1.0)％增至(37.0±0.8)％(P＜0.01).与正常对照组相比,ASB组LDH漏出率和ROS水平明显增加,MMP呈下降趋势;与ASB 20 9·L-1组相比,加入还原剂NAC后,细胞存活率和MMP水平明显增加(P＜0.05),LDH和ROS水平明显降低(P＜0.05);加入CsA后,细胞存活率显著降低(P＜0.01),LDH和细胞内ROS水平明显增加(P＜0.05).随着ASB浓度增加,HK-2细胞上清液中的MDA水平明显增加,GSH,SOD和T-ATP酶活性逐渐减弱;同时细胞内胱天蛋白酶原3、Bax和Cyt c蛋白表达升高.结论 ASB对HK-2细胞的毒性作用可能是通过干扰HK-2细胞线粒体能量代谢,改变细胞内氧化还原状态,耗竭细胞内GSH和SOD,导致细胞内ROS大量堆积,引发脂质过氧化作用,破坏细胞膜的通透性,导致Cyt c等凋亡因子从线粒体释放,进而引发细胞凋亡或坏死.
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