【摘 要】
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背景:钙离子在肥大细胞活化后的脱颗粒反应起重要作用.瞬时感受器电位M7(transient receptor potential melastatin 7,TRPM7)是肥大细胞重要的候选通道.目的:构建携带大鼠靶
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背景:钙离子在肥大细胞活化后的脱颗粒反应起重要作用.瞬时感受器电位M7(transient receptor potential melastatin 7,TRPM7)是肥大细胞重要的候选通道.目的:构建携带大鼠靶向TRPM7-siRNA的反转录病毒载体并检测其对大鼠RBL-2H3细胞抗原活化的影响.方法:实验设计3个TRPM7-siRNA序列和1个无关对照序列,克隆到酶切的pSuper-retro-neo-GFP反转录病毒载体,用重组质粒pSuper-retro-neo-GFP-shTRPM7-(1,2,3) 采用脂质体Lipofectamine 2000转染RBL-2H3细胞,采用Western blot检测干扰效率.筛选出最有效的pSuper-retro-neo-GFP-siTRMP7与包装质粒共转染293FT细胞生成反转录病毒并感染RBL-2H3细胞,荧光实时定量PCR及Western blot检测TRPM7-siRNA的沉默效果.检测β-氨基已糖苷酶活性探讨RBL-2H3细胞抗原活化程度的改变.结果与结论:转染后的各组细胞中siTRPM7-3转染组的沉默效率最高(P < 0.05).pSuper-retro-neo-GFP-siTRMP7-3干扰组的TRPM7基因的mRNA水平和蛋白水平显著下调,致敏后其β-氨基已糖苷酶活性明显降低(P < 0.05).结果提示,降低TRPM7基因的表达可抑制RBL-2H3细胞的抗原活化.
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