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本研究应用二抗技术建立了灵敏检测奶中孕酮含量的酶联免疫分析法(EIA)。微量滴定板首先包被二抗(羊抗兔IgG),4℃孵育过夜。免疫反应溶液中包括2μl的奶样(用分析缓冲液稀释至20μl),50μl酶标孕酮和50μl抗体。标准曲线的测试范围为0.2~12.5pg/孔,相当于0.1~6.25ng/ml,最小可测量0.15pg/孔,50%结合率对应的孕酮浓度是0.92pg/孔。样品测定的平均批内与批间变异系数分别是4.68%和11.10%。样品测定的回收率为92.67±10.79%。应用该方法测定全奶