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目的
探讨脂多糖诱导的肺微血管内皮细胞(PMVECs)炎性反应及可能的机制。
方法分离培养SD大鼠肺微血管内皮细胞，将其分为对照组和LPS (0.01、0.1、1、10 mg/L)干预组。酶联免疫吸附法检测细胞间黏附分子–1(ICAM–1)，放射免疫法检测肿瘤坏死因子–α (TNF–α)和白细胞介素–8 (IL–8)的水平，实时荧光定量PCR检测TLR–4 mRNA的表达；蛋白质免疫印迹法检测核转录因子–κB (NF–κB)抑制蛋白IκB–α和NF–κB p65蛋白水平以及免疫细胞化学染色(NF–κB p65)观察NF–κB的活性变化。
结果与对照组比较，LPS组分泌的细胞因子显著增加并呈剂量依赖性；以10 mg/L的LPS刺激PMVECs，3种细胞因子于2、6和12 h均升高；ICAM–1、TNF–α于2 h达分泌高峰，IL–8于12 h达分泌高峰；2 h TLR–4 mRNA表达明显增高达峰值，并持续12 h (分别为4.34±1.42、3.62±1.45和3.32±1.36)，均高于对照组(1.00±0.00)，差异有统计学意义(均P<0.05)；LPS刺激0.5、2、6和12 h后，NF–κB的活性显著增加，表现为抑制蛋白IκB–α迅速降解，p65蛋白同步释出并转入细胞核内。
结论LPS刺激PMVECs释放细胞因子，其效应并呈剂量依赖性，可能是通过激活TLR–4–NF–κB信号通路诱导了PMVECs的炎性损伤。