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【中图分类号】R286 【文献标识码】A【文章编号】1550-1868（2014）10
【摘要】目的：建立高效液相色谱法测定益气固肠颗粒中橙皮苷含量的方法。方法：采用AgiLent C18（150mm×4.6mm，5μm）色谱柱，甲醇-水-冰醋酸（36：64：0.1）为流动相，流速为1.0mL/min，检测波长为283nm，进样体积5μL。结果：橙皮苷在0.4064μg～2.4384μg的范围内呈良好的相关性，相关系数为0.9999，平均回收率分别为99.36%、RSD为1.01%。结论：本方法操作准确、简便、快速，可有效用于益气固肠颗粒的质量控制。
【关键词】RP-HPLC法；益气固肠颗粒；橙皮苷
益气固肠颗粒是由陈皮、白术、肉豆蔻等九味中药组成，对久痢、久泻、腹胀腹痛等疾病疗效显著。方中白术、党参益气健脾，陈皮含的橙皮苷有调整肠胃功能及抗炎作用，是其重要的药理活性成分。所以本文以橙皮苷为考察指标，用高效液相色谱法测定益气固肠颗粒中橙皮苷含量[1-4]，可以有效控制其内在质量，为橙皮苷含量测定提供了一个简便、灵敏、准确的方法。本文建立了HPLC法测定该制剂中橙皮苷的含量，方法操作简便，稳定性好，精密度高，结果可靠，为该制剂控制质量提供依据[5]。
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 仪器和设备
高效液相色谱仪：德国戴安（1）UItimate3000紫外检测器；美国安捷伦（2）1200紫外检测器；Meltter AE240双量程电子天平（梅特勒-托利多仪器有限公司），AB204-E电子天平（梅特勒-托利多仪器有限公司）；紫外分光光度计UV-2401（日本岛津）。
1.1.2 试剂与试药
橙皮苷对照品（批号：110721-201115 规格：约20mg，供含量测定用，含量以95.3%计。），购自中国食品药品检定研究院；甲醇为色谱纯，冰醋酸为分析纯，水为重蒸水。
1.2 实验方法
1.2.1 系统适用性试验及色谱条件
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-冰醋酸（36：64：0.1）为流动相；检测波长为283nm，进样体积5μL。理论板数按橙皮苷峰计算应不低于2000。
1.2.2 对照品溶液的制备
称取橙皮苷对照品约10mg，精密称定为10.16mg，置50ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml含橙皮苷0.2032mg）。
1.2.3 供试品溶液的制备
将本品研细，取约5g，精密称定，置索氏提取器中，加石油醚（60～90℃）100ml，加热回流2.5小时，弃去石油醚，药渣挥干，精密加入甲醇80ml，密塞，超声处理（功率250W，频率40kHz）30分钟，放冷，滤过，滤液置100ml量瓶中，用少量甲醇分数次洗涤容器，洗涤液入同一量瓶中，加甲醇制刻度，摇匀，即得。
1.2.4 检测波长的选择
取橙皮苷对照品溶液适量，于200～400nm波长下测定光谱图。
2 实验结果
2.1 检测波长的选择
橙皮苷对照品在283.2nm波长处有最大吸收峰，同时参考中国药典2010年版一部陈皮标准中橙皮苷的含量测定检测波长为283nm，故检测波长选定为283nm。
2.2 线性关系范围
精密吸取对照品溶液2、4、6、8、10、12μl，按上述色谱条件分别注入液相色谱仪，测定峰面积，以进样量为横坐标（X），以峰面积为纵坐标（Y），绘制标准曲线方程为Y=5.765X -0.0199（r=0.9999），表明橙皮苷在0.4064μg～2.4384μg范围内呈良好线性关系。
2.3 專属性试验
取按处方比例缺陈皮的阴性对照样品，按含量测定项下方法测定HPLC色谱图，同法测定橙皮苷对照品、供试品的HPLC色谱图。结果阴性对照样品的色谱图中，在与橙皮苷吸收峰保留时间的相应位置上，无吸收峰出现，表明阴性对照无干扰，此方法专属性强。结果见图1、2、3。
2.4 稳定性试验
取供试品溶液，分别在0、2、4、8、12小时进样，记录峰面积，以供试品溶液中橙皮苷的吸收峰面积的变化，考察其稳定性。结果显示样品溶液峰面积RSD为0.42%，表明样品在12小时内稳定性良好。
2.5 中间精密度试验
取本品约5g，精密称定，按1.2.3项下制备供试品溶液，由不同人员、不同时间、使用不同高效液相色谱仪，按含量测定项下方法操作，测定绿原酸的含量。结果橙皮苷峰面积RSD为1.07%，表明此方法精密度良好。
2.6 重复性试验
取本品约5g，共6份，精密称定，按1.2.3项下制备供试品溶液，进行含量测定。结果橙皮苷峰面积RSD为0.78%，表明方法有良好的重现性。
2.7 回收率试验
取本品约2.5g（批号20130301，含量5.4mg/g），精密称定，共6份，分别置于索氏提取器中，加石油醚（60～90℃）100ml，加热回流2.5小时，弃去石油醚，药渣挥干，精密加入橙皮苷对照品溶液（浓度约为0.6435mg/ml）20ml，按1.2.3项下制备供试品溶液，进行含量测定，计算6次平均回收率为99.36%、RSD为1.01%。表明此方法准确、可行。结果见表1。
2.8 样品含量测定
分别取3批益气固肠颗粒（批号分别为20130301、20130302、20130303）约5g，精密称定，按1.2.3项下制备供试品溶液，分别精密吸取供试品溶液各5μL，注入液相色谱仪，测定峰面积，计算3批样品含量分别为5.4、5.6、5.3 mg/g。 3 讨论
3.1 在含量测定方法建立前期，对流动相进行了系统考察[6-8]。根据10版药典及相关材料，我们采用乙腈-水（20：80）、甲醇-水（36：64）、甲醇-水-冰醋酸（36：64：0.1）等三个流动相，经过试验得出甲醇与水中加入冰醋酸后峰形良好，峰形对称，所以选择甲醇-水-冰醋酸（36：64：0.1）为此方法的流动相。
3.2 本文采用高效液相色谱法测定益气固肠颗粒中橙皮苷的含量，在此色谱条件下，理论塔板数按橙皮苷峰均不低于2000，且橙皮苷与其它组分均能达到基线分离[9-10]。本法具有简便、灵敏、精密度高、专属性强等特点，对控制和提高益气固肠颗粒内在质量及进行相关研究具有重要的参考价值。
参考文献
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版（一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2010：132.
[2]官福兰，王如俊，王建华. 陈皮及橙皮苷对离体肠管运动的影响[J].时珍国医国药， 2002， 13（2）： 65.
[3]王晓玲， 秦德安. 橙皮苷对羟自由基引发红细胞膜操作的影响[J]. 中草药， 1998， 33（2）： 83-85.
[4]朱思明， 于淑娟， 杨连生. 橙皮苷-铜配合物的配位模式和橙皮苷的抗氧化机理[J]. 天然产物研究与开发， 2006， 18： 386-389.
[5]孙桂莲，庞丽明. 高效液相色谱法测定固肠颗粒中盐酸小檗碱的含量[J].辽宁中医杂志，2005，32（4）：350-351.
[6]田玉先，陳金文，景永民，金媛. HPLC法测定泻痢固肠丸中橙皮苷的含量[J]. 陕西中医学院学报，2004，27（5）： 59-60.
[7]王慧.养血荣筋丸中橙皮苷含量测定[J]. 中国新技术新产品，2012，（5）：5.
[8]韦媛媛，陈忠坤，肖芳，等.广西不同品种柑橘皮中橙皮苷含量测定[J]. 食品科技，2011，36（10）：256-257.
[9]赵宇，谢培山，卢平华，等.枳实、枳壳、青皮和陈皮等药材中辛弗林含量测定研究[J].世界科学技术：中医药现代化，2006，8（4）：64-67.
[10]李希，谢守德，袁海英，朱庆丰.陈皮浓缩颗粒的鉴别和橙皮苷含量测定[J]. 四 川 中 医，2001，19（6）：20-21.
【摘要】目的：建立高效液相色谱法测定益气固肠颗粒中橙皮苷含量的方法。方法：采用AgiLent C18（150mm×4.6mm，5μm）色谱柱，甲醇-水-冰醋酸（36：64：0.1）为流动相，流速为1.0mL/min，检测波长为283nm，进样体积5μL。结果：橙皮苷在0.4064μg～2.4384μg的范围内呈良好的相关性，相关系数为0.9999，平均回收率分别为99.36%、RSD为1.01%。结论：本方法操作准确、简便、快速，可有效用于益气固肠颗粒的质量控制。
【关键词】RP-HPLC法；益气固肠颗粒；橙皮苷
益气固肠颗粒是由陈皮、白术、肉豆蔻等九味中药组成，对久痢、久泻、腹胀腹痛等疾病疗效显著。方中白术、党参益气健脾，陈皮含的橙皮苷有调整肠胃功能及抗炎作用，是其重要的药理活性成分。所以本文以橙皮苷为考察指标，用高效液相色谱法测定益气固肠颗粒中橙皮苷含量[1-4]，可以有效控制其内在质量，为橙皮苷含量测定提供了一个简便、灵敏、准确的方法。本文建立了HPLC法测定该制剂中橙皮苷的含量，方法操作简便，稳定性好，精密度高，结果可靠，为该制剂控制质量提供依据[5]。
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 仪器和设备
高效液相色谱仪：德国戴安（1）UItimate3000紫外检测器；美国安捷伦（2）1200紫外检测器；Meltter AE240双量程电子天平（梅特勒-托利多仪器有限公司），AB204-E电子天平（梅特勒-托利多仪器有限公司）；紫外分光光度计UV-2401（日本岛津）。
1.1.2 试剂与试药
橙皮苷对照品（批号：110721-201115 规格：约20mg，供含量测定用，含量以95.3%计。），购自中国食品药品检定研究院；甲醇为色谱纯，冰醋酸为分析纯，水为重蒸水。
1.2 实验方法
1.2.1 系统适用性试验及色谱条件
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-冰醋酸（36：64：0.1）为流动相；检测波长为283nm，进样体积5μL。理论板数按橙皮苷峰计算应不低于2000。
1.2.2 对照品溶液的制备
称取橙皮苷对照品约10mg，精密称定为10.16mg，置50ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml含橙皮苷0.2032mg）。
1.2.3 供试品溶液的制备
将本品研细，取约5g，精密称定，置索氏提取器中，加石油醚（60～90℃）100ml，加热回流2.5小时，弃去石油醚，药渣挥干，精密加入甲醇80ml，密塞，超声处理（功率250W，频率40kHz）30分钟，放冷，滤过，滤液置100ml量瓶中，用少量甲醇分数次洗涤容器，洗涤液入同一量瓶中，加甲醇制刻度，摇匀，即得。
1.2.4 检测波长的选择
取橙皮苷对照品溶液适量，于200～400nm波长下测定光谱图。
2 实验结果
2.1 检测波长的选择
橙皮苷对照品在283.2nm波长处有最大吸收峰，同时参考中国药典2010年版一部陈皮标准中橙皮苷的含量测定检测波长为283nm，故检测波长选定为283nm。
2.2 线性关系范围
精密吸取对照品溶液2、4、6、8、10、12μl，按上述色谱条件分别注入液相色谱仪，测定峰面积，以进样量为横坐标（X），以峰面积为纵坐标（Y），绘制标准曲线方程为Y=5.765X -0.0199（r=0.9999），表明橙皮苷在0.4064μg～2.4384μg范围内呈良好线性关系。
2.3 專属性试验
取按处方比例缺陈皮的阴性对照样品，按含量测定项下方法测定HPLC色谱图，同法测定橙皮苷对照品、供试品的HPLC色谱图。结果阴性对照样品的色谱图中，在与橙皮苷吸收峰保留时间的相应位置上，无吸收峰出现，表明阴性对照无干扰，此方法专属性强。结果见图1、2、3。
2.4 稳定性试验
取供试品溶液，分别在0、2、4、8、12小时进样，记录峰面积，以供试品溶液中橙皮苷的吸收峰面积的变化，考察其稳定性。结果显示样品溶液峰面积RSD为0.42%，表明样品在12小时内稳定性良好。
2.5 中间精密度试验
取本品约5g，精密称定，按1.2.3项下制备供试品溶液，由不同人员、不同时间、使用不同高效液相色谱仪，按含量测定项下方法操作，测定绿原酸的含量。结果橙皮苷峰面积RSD为1.07%，表明此方法精密度良好。
2.6 重复性试验
取本品约5g，共6份，精密称定，按1.2.3项下制备供试品溶液，进行含量测定。结果橙皮苷峰面积RSD为0.78%，表明方法有良好的重现性。
2.7 回收率试验
取本品约2.5g（批号20130301，含量5.4mg/g），精密称定，共6份，分别置于索氏提取器中，加石油醚（60～90℃）100ml，加热回流2.5小时，弃去石油醚，药渣挥干，精密加入橙皮苷对照品溶液（浓度约为0.6435mg/ml）20ml，按1.2.3项下制备供试品溶液，进行含量测定，计算6次平均回收率为99.36%、RSD为1.01%。表明此方法准确、可行。结果见表1。
2.8 样品含量测定
分别取3批益气固肠颗粒（批号分别为20130301、20130302、20130303）约5g，精密称定，按1.2.3项下制备供试品溶液，分别精密吸取供试品溶液各5μL，注入液相色谱仪，测定峰面积，计算3批样品含量分别为5.4、5.6、5.3 mg/g。 3 讨论
3.1 在含量测定方法建立前期，对流动相进行了系统考察[6-8]。根据10版药典及相关材料，我们采用乙腈-水（20：80）、甲醇-水（36：64）、甲醇-水-冰醋酸（36：64：0.1）等三个流动相，经过试验得出甲醇与水中加入冰醋酸后峰形良好，峰形对称，所以选择甲醇-水-冰醋酸（36：64：0.1）为此方法的流动相。
3.2 本文采用高效液相色谱法测定益气固肠颗粒中橙皮苷的含量，在此色谱条件下，理论塔板数按橙皮苷峰均不低于2000，且橙皮苷与其它组分均能达到基线分离[9-10]。本法具有简便、灵敏、精密度高、专属性强等特点，对控制和提高益气固肠颗粒内在质量及进行相关研究具有重要的参考价值。
参考文献
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版（一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2010：132.
[2]官福兰，王如俊，王建华. 陈皮及橙皮苷对离体肠管运动的影响[J].时珍国医国药， 2002， 13（2）： 65.
[3]王晓玲， 秦德安. 橙皮苷对羟自由基引发红细胞膜操作的影响[J]. 中草药， 1998， 33（2）： 83-85.
[4]朱思明， 于淑娟， 杨连生. 橙皮苷-铜配合物的配位模式和橙皮苷的抗氧化机理[J]. 天然产物研究与开发， 2006， 18： 386-389.
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[6]田玉先，陳金文，景永民，金媛. HPLC法测定泻痢固肠丸中橙皮苷的含量[J]. 陕西中医学院学报，2004，27（5）： 59-60.
[7]王慧.养血荣筋丸中橙皮苷含量测定[J]. 中国新技术新产品，2012，（5）：5.
[8]韦媛媛，陈忠坤，肖芳，等.广西不同品种柑橘皮中橙皮苷含量测定[J]. 食品科技，2011，36（10）：256-257.
[9]赵宇，谢培山，卢平华，等.枳实、枳壳、青皮和陈皮等药材中辛弗林含量测定研究[J].世界科学技术：中医药现代化，2006，8（4）：64-67.
[10]李希，谢守德，袁海英，朱庆丰.陈皮浓缩颗粒的鉴别和橙皮苷含量测定[J]. 四 川 中 医，2001，19（6）：20-21.