【摘 要】
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柞蚕微粒子病的病原为柞蚕微孢子虫(Nosema pernyi)。采用SMART(switching mechanism at 5’-end of RNA transcript)技术构建柞蚕微孢子虫全长cDNA文库,初始文库滴度4.2×10
【机 构】
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沈阳农业大学植物保护学院; 辽宁省昆虫资源工程技术研究中心,沈阳农业大学生物科学技术学院;
【基金项目】
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现代农业产业技术体系建设专项(No.CARS-22);沈阳市发改委科研项目(No.2011154);沈阳农业大学国家自然科学基金启动基金项目(No.20112002);沈阳农业大学校青年基金项目(No.201010002)
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柞蚕微粒子病的病原为柞蚕微孢子虫(Nosema pernyi)。采用SMART(switching mechanism at 5’-end of RNA transcript)技术构建柞蚕微孢子虫全长cDNA文库,初始文库滴度4.2×106pfu/mL,文库容量1.0×107pfu,重组率为98.39%。随机挑取32个克隆,经PCR检测插入的片段长度在750~3 000 bp之间,平均长度>1 000 bp。挑选文库中864个克隆进行表达序列标签(EST)测序,得到626条高质量的EST,拼接后得到197条单一基因(unigenes),包含64条重叠群(contigs)和133条单一EST,冗余度为68.53%。将这些Unigenes与NCBI数据库进行比对,146条Unigenes在蜜蜂微孢子虫(Nosema ceranae)、家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)、兔脑炎微孢子虫(Encephalitozoon cuniculi)等的基因组中比对到同源基因。在随机EST测序中克隆获得一个孢子形成蛋白(sporulation protein)基因,命名为NpSP-1。该基因ORF长度为1 014 bp,编码337个氨基酸,蛋白质的理论分子质量为39.2 kD,等电点5.71。柞蚕微孢子虫cDNA文库的构建及EST测序的完成,为进一步发现和研究柞蚕微孢子虫的功能基因奠定了基础。
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