【摘 要】
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目的 构建细胞骨架蛋白OBSCN基因过表达和敲除的稳转细胞系,初步探究OBSCN突变对肝癌细胞增殖和迁移能力的影响。方法 qPCR技术确定HepG2肝癌细胞有无OBSCN本底表达,慢病毒感染HepG2细胞构建过表达细胞系;Crispr cas9技术构建敲除细胞系;并利用Western blot技术检测敲除及过表达细胞Obscurin蛋白表达量,CCK-8法和Transwell小室法探究OBSCN突
【机 构】
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山东第一医科大学(山东省医学科学院)学报
【出 处】
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山东第一医科大学(山东省医学科学院)学报
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目的 构建细胞骨架蛋白OBSCN基因过表达和敲除的稳转细胞系,初步探究OBSCN突变对肝癌细胞增殖和迁移能力的影响。方法 qPCR技术确定HepG2肝癌细胞有无OBSCN本底表达,慢病毒感染HepG2细胞构建过表达细胞系;Crispr cas9技术构建敲除细胞系;并利用Western blot技术检测敲除及过表达细胞Obscurin蛋白表达量,CCK-8法和Transwell小室法探究OBSCN突变细胞株的增殖和迁移能力。结果 qPCR验证HepG2细胞无OBSCN本底表达,慢病毒感染得到HepG2 H21157过表达稳转细胞系和HepG2 GL119对照空载体稳转细胞系;菌落PCR、质粒PCR以及基因测序结果验证敲除重组质粒reOBSCN构建成功,转染得到OBSCN敲除的HepG2 OBSCN KO稳转细胞系和对照空载体HepG2 ecas稳转细胞系;Western blot技术验证OBSCN敲除及过表达细胞系构建成功;CCK-8法结果显示OBSCN过表达加快了HepG2细胞增殖,差异有统计学意义（P＜0.000 1）,OBSCN基因的敲除可以减慢HepG2细胞增殖,差异有统计学意义（P＜0.000 1）;Transwell小室法得到HepG2 H21157、HepG2 GL119的迁移细胞数分别为150.30±14.95、136.50±15.02,HepG2 OBSCN KO、HepG2 ecas的迁移细胞数分别为112.70±20.30、147.8±11.55,差异有统计学意义（P ＜0.01）。结论 OBSCN基因的过表达会加快HepG2肝癌细胞的增殖和迁移,OBSCN基因的敲除会减慢HepG2肝癌细胞的增殖和迁移。
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