【摘 要】
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[目的]通过优化限制因素,探索水曲柳原生质体制备的最佳方法.[方法]采用酶解法,对影响原生质体分离的影响因素,设计正交实验,通过显微镜观察计数比较原生质体的分离效果.[结
【机 构】
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东北林业大学生命科学学院,黑龙江哈尔滨150040
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[目的]通过优化限制因素,探索水曲柳原生质体制备的最佳方法.[方法]采用酶解法,对影响原生质体分离的影响因素,设计正交实验,通过显微镜观察计数比较原生质体的分离效果.[结果]在M7和M9的酶液组合对原生质体分离效果最好,产量分别为6.61×105个/g和5.76×105个/g,活力分别为97.57％和97.07％.在11％的渗透压中原生质体产量最高.pH 5.2时产量最高,pH值增加不利于原生质体产量增加.酶解时间对原生质体产量差异显著,虽然14h产量最高,但6h、8h、12h、14h之间产量差异不显著.[结论]采用酶解法初步获得了水曲柳原生质体分离的最适条件,在预处理3 h,渗透压为11％,在1.5％纤维素酶+0.8％离析酶+0.4％半纤维素酶中,pH值为5.2,黑暗条件下酶解14h.
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