【摘 要】
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目的 研究多西环素(Doxy)对转化生长因子-β1 (TGF-β1)诱导人胚肺成纤维细胞(MRC-5)向肌成纤维细胞转化的影响,探索Doxy抗肺纤维化的作用.方法 体外培养MRC-5,采用不同浓度的Doxy(0、2.5、5.0、10.0、20.0、40.0、80.0 μg/mL)干预,72 h后采用MTT法检测细胞活性以确定Doxy浓度并进行分组.将该实验分为对照组(MRC-5)、阳性对照组(TGF-β110 ng/mL)、Doxy 2.5 μg/mL组、Doxy 5.0 μg/mL组、Doxy 10.0
【机 构】
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嘉兴市第一医院(嘉兴学院附属医院)风湿免疫科,浙江嘉兴314000
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目的 研究多西环素(Doxy)对转化生长因子-β1 (TGF-β1)诱导人胚肺成纤维细胞(MRC-5)向肌成纤维细胞转化的影响,探索Doxy抗肺纤维化的作用.方法 体外培养MRC-5,采用不同浓度的Doxy(0、2.5、5.0、10.0、20.0、40.0、80.0 μg/mL)干预,72 h后采用MTT法检测细胞活性以确定Doxy浓度并进行分组.将该实验分为对照组(MRC-5)、阳性对照组(TGF-β110 ng/mL)、Doxy 2.5 μg/mL组、Doxy 5.0 μg/mL组、Doxy 10.0 μg/mL组、Doxy 20.0 μg/mL组,干预72 h后采用蛋白免疫印迹法(Western blotting)、细胞免疫荧光检测α-平滑肌肌动蛋白(αt-SMA)、纤维连接蛋白(FN)、Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)蛋白的表达,采用实时荧光定量法(qRT-PCR)检测α-SMA、FN、Col Ⅰ mRNA相对量的表达.采用单因素方差分析进行统计分析.结果 Doxy浓度为40.0μg/mL及80.0 μg/mL时MRC-5细胞的活性开始出现下降,分别为0.93±0.03、0.83±0.08,且在80.0μg/mL处理时MRC-5细胞的活性与对照组相比出现明显的抑制(P＜0.05).qRT-PCR显示阳性对照组α-SMA、FN、Col Ⅰ mRNA的相对表达均明显高于对照组(1.62±0.04 vs.0.94±0.05,4.33±0.28 vs.0.98±0.06,2.25±0.97 vs.1.04±0.04,均P＜0.05),而Doxy 10.0 μg/mL组、Doxy 20.0 μg/mL组α-SMA、FN、Col Ⅰ mRNA的表达较阳性对照组均明显下降(0.70±0.15、0.41±0.11 vs.1.62±0.04;1.19 ±0.85、0.79±0.06 vs.4.33±0.28;0.94±0.12、0.52±0.07 vs.2.25±0.97,均P＜0.05).Western blotting及免疫荧光也发现了同样的变化趋势.结论 Doxy可通过抑制TGF-β1诱导的肺成纤维细胞分化发挥抗纤维化作用.
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