椭圆食粉螨ISSR-PCR反应体系正交优化试验设计

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以椭圆食粉螨基因组DNA为模板,采用正交试验设计方法,建立椭圆食粉螨的ISSR最佳反应体系。优化得到的反应体系为:Mg^2+浓度1.0mmol/L、Taq DNA聚合酶1.0U、dNTPs浓度0.2μmol/L、引物浓度0.3μmol/L、模版DNA量40ng。反应程序为:94℃预变性5min;94℃变性1min,48℃、50℃、52℃(不同引物退火温度各异)复性1min,72℃延伸1.5min,35个循环;72℃延伸5min;4℃保存。通过梯度退火试验,确定不同引物的最适退火温度。
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