【摘 要】
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目的 构建polo样激酶-1(PLK1)基因小干扰RNA(siRNA),观察其对肝癌细胞凋亡的影响.方法 设计合成3个PLK1 siRNA(siRNA1、siRNA2、siRNA3)干扰序列,构建干扰载体,转染人肝癌细胞株SMMC-7721,观察48 h后转染效率,采用实时定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)筛选下调PLK1 mRNA效果最好的siRNA；然后选择以该siRNA转染48 h的S
【机 构】
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目的 构建polo样激酶-1(PLK1)基因小干扰RNA(siRNA),观察其对肝癌细胞凋亡的影响.方法 设计合成3个PLK1 siRNA(siRNA1、siRNA2、siRNA3)干扰序列,构建干扰载体,转染人肝癌细胞株SMMC-7721,观察48 h后转染效率,采用实时定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)筛选下调PLK1 mRNA效果最好的siRNA；然后选择以该siRNA转染48 h的SMMC-7721细胞,分别以实时定量RT-PCR和Western blot法检测空白组、对照组及转染组细胞中PLK1基因和蛋白表达；流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡的改变.结果 肝癌细胞株SMMC-7721中存在PLK1蛋白的过表达.应用靶向PLK1的siRNA转染SMMC-7721细胞48 h后,PLK1 mRNA相对水平siRNA2组分别较无关对照组和空白对照组下降了74％和78％,而PLK1蛋白的表达siRNA2组分别较无关对照组和空白对照组下降了83％和88％,抑制率达88％；siRNA2组中出现大量凋亡细胞,与对照组比较差异有统计学意义(P＜ 0.05).结论 PLK1基因在肝癌细胞增殖中具有重要的调控作用.PLK1-siRNA转染可明显抑制癌细胞增殖,诱导凋亡是其重要机制之一。
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