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摘要：（HPLC-MS/MS）是一种检测兽药残留的重要技术，该技术在应用中主要是通过高效液相色谱原理综合相应的定性、定量分析系统对具有高沸点、热不稳定化合物、非挥发新的化合物进行分离鉴定，该技术在应用中主要通过大气压化学电离技术和电喷雾电离技术对待检测物体进行定性分析。本文中首先探究了高效液相色谱使用在兽药残留检测中存在的问题，然后再结合实际情况，提出完善高效液相色谱使用在兽药残留检测中的处理措施，为完善我国现有高效液相色谱兽药残留检测技术提供些许参考意见。
关键词：兽药残留检测;高效液相色谱;问题探究;处理对策
引言
高效液相色谱的工作原理是利用HPLC技术将待分析的成分分离出来，并将其送入质谱检测系统。高效液相色谱技术在离子源的高温高压下，便可以将待检测物体由液态向气态进行转变，使带检测物体成为气态化的准分子离子，该分析仪可以对待检测物体进行一级质量分析，并根据质核比率进行质荷比分离，这样待检测气体在碰撞式中母离子变换诱导解离，而母离子的特征碎片会随着二级质量分析仪再次进行分离。
一、高效液相色谱使用在兽药残留检测中存在的问题
在采用高效液相色谱技术进行兽药残留分析的过程，主要存在以下几点缺陷：一是高效液相色谱技术在采用中主要以筛选法为主，测定动物饲料结构相似药物的过程中，其主要是进行抗原抗体反应，因此不能对动物饲料中同类型药物进行定性分析，导致动物饲料中的兽药残留分析结论精确度较差;二是液相色谱技术有时在测定畜牧产品中灵敏度低，选择性差等特点，越来越难以满足用户的要求;三是现阶段对兽药残留的限制越来越严格，我国政府已经制定并实施了兽药残留标准，明确规定了在动物尿液中的进行兽药残留分析中，对禁用兽药（A类），如硝基呋喃等，在分析期间判定点（IPs）不在4以下，而对禁用兽药（B类），如磺胺类，判定点（IPs）在不在3以下的较高要求。
二、完善高效液相色谱使用在兽药残留检测中的处理措施
1.采用酸化乙腈进行样品提取，提高兽药残留量检测精度
对动物性食品进行兽药残留检测，可以保障动物饲料的健康性，在采用高效液相色谱进行饲料中兽药残留检测的过程中，如果仅是采用单一药品样品检测，那么可能无法提取饲料样品中的兽药残留量，但是对样品采用酸化乙腈进行直接提取，在交提取后的样品采用甲酸溶液进行稀释，这样便可以形成以甲酸溶液和乙腈体系为主的梯度洗脱，在对兽药残留药进行检测中，利用C18色谱柱便可以精准的检测出动物饲料中的兽药残留量，采用这一方法便可以对动物饲料中的苯比咪唑类药物浓度进行监测，通常监测范围在0.02～10.0mg/L，此外在这一范围内可以形成良好的线性监测数据。在对样品进行检测完毕后，再通过采用三氯甲烷提取一定的溶液，采用SPE小柱进行深度净化，就可以再次形成外标法定量，采用这一方法对饲料中的兽药残留量回收率较高，且定量限定额可达到0.05mg/L。
2.利用液相色谱-串联质谱法，提高畜产品兽药残留量测定精度
在对畜产品中的兽药残留量进行检测的过程中，可采用液相色谱-串联质谱法进行检测，该方法可以对畜产品中的喹诺酮类药物进行精准检测，通常采用串联质谱法可以对动物源性食品中弗罗沙星、依诺沙星、诺氟沙星、斯帕沙星等7种喹诺酮类药物进行检测。在检测过程中依然可以采用乙腈溶液进行提取，将提取后的溶液通过正乙烷溶液进行离析脱脂，在采用小柱净化对强阳离子进行固相萃取，这样便可以对1.0～100ug/L的喹诺酮类药物进行检测，在对动物源性食品中的兽药残留量进行回收率检查的过程中，发现动物源性食品中的兽药残留量回收率可达到93%，在对兽药残留进行精准检测的过程中，还可以通过串联质谱法与正离子检测法相配合的形式，对不同类型的氨基酸缩合而成的小分子肽类兽药成分进行监测，但是在这一过程中需要采用浓度在4%的三氯乙酸乙腈溶液对蛋白进行除去，再采用浓度在1%的甲酸和1%的甲酸乙腈进行混合，这样便可以的畜产品中的多肽类抗生素进行提取，且提取回收率在75%左右。
3.利用甲醇-乙酸乙酯，提高畜禽尿液兽药检测精度
在对畜禽尿液中的兽药进行检测的过程中，可以采用乙醇-乙酸乙酯进行检测，通过这一方法便可以对畜禽尿液中十余种镇静剂内药物进行检测，其主要步骤是采用浓度在1%的甲酸溶液与乙腈溶液进行混合，然后通过色谱柱对样品进行分离，进而采用电喷雾正电子模式对样品進行电离，再通过基质校准对畜禽尿液中的兽药残留量进行定量分析。同时在检测过程中可以采用LC-MS/MS的数据谱图受仪器在全扫描模式下进行兽药残留量检测，但是在检测中不同仪器条件（如碰撞能、碰撞气体流量等）给出的化合物高效液相色谱图会有很大差异，这就需要检测人员对检测仪器进行精准调节。
三、结束语
高效液相色谱技术在科学研究中可以作为一种高效分离、定性、定量的离子检测技术，对饲料、食品、尿液中的兽药残留量具有着显著的检测优势。同时在采用该技术的过程中，对样品的处理工艺较为简单，可以在同一步骤中对样品中的多种药物成分进行残留检测，并不需要对药品进行衍生化反应，这样便可以显著提高样品的检测精度。
在科研院所和大型质检机构可以应用所以高效液相色谱技术，是因为高效液相色谱技术在对残留兽药进行前扫描测定的过程中，可以采用标准物质校准方法对残留兽药中的化合物结构进行离子分析，进一步提高我国现有高效液相色谱技术的检测精度。
参考文献
[1]徐伟，耿士伟，刘路，etal.高效液相色谱—串联质谱法同时检测猪肉中125种兽药残留[J].天津农业科学，2020（2）.
[2]陈兴连，林涛，刘兴勇，etal.超高效液相色谱-串联质谱法快速测定鱼和虾中多类禁，限用兽药残留[J].色谱，2020（5）：538-546.
[3]黄梅花.QuEChERS结合液相色谱串联质谱法同时测定鸡蛋中氟虫腈与氯霉素等7种农兽药残留[J].食品安全质量检测学报，2020，011（006）：1821-1826.
[4]付体鹏，张峰，刘力，etal.高效液相色谱-电喷雾-iFunnel-串联质谱法同时测定猪尿液中20种禁用兽药残留[J].分析测试学报，2019，032（010）：1153-1159.
（武汉海关技术中心 湖北 武汉 430000）
关键词：兽药残留检测;高效液相色谱;问题探究;处理对策
引言
高效液相色谱的工作原理是利用HPLC技术将待分析的成分分离出来，并将其送入质谱检测系统。高效液相色谱技术在离子源的高温高压下，便可以将待检测物体由液态向气态进行转变，使带检测物体成为气态化的准分子离子，该分析仪可以对待检测物体进行一级质量分析，并根据质核比率进行质荷比分离，这样待检测气体在碰撞式中母离子变换诱导解离，而母离子的特征碎片会随着二级质量分析仪再次进行分离。
一、高效液相色谱使用在兽药残留检测中存在的问题
在采用高效液相色谱技术进行兽药残留分析的过程，主要存在以下几点缺陷：一是高效液相色谱技术在采用中主要以筛选法为主，测定动物饲料结构相似药物的过程中，其主要是进行抗原抗体反应，因此不能对动物饲料中同类型药物进行定性分析，导致动物饲料中的兽药残留分析结论精确度较差;二是液相色谱技术有时在测定畜牧产品中灵敏度低，选择性差等特点，越来越难以满足用户的要求;三是现阶段对兽药残留的限制越来越严格，我国政府已经制定并实施了兽药残留标准，明确规定了在动物尿液中的进行兽药残留分析中，对禁用兽药（A类），如硝基呋喃等，在分析期间判定点（IPs）不在4以下，而对禁用兽药（B类），如磺胺类，判定点（IPs）在不在3以下的较高要求。
二、完善高效液相色谱使用在兽药残留检测中的处理措施
1.采用酸化乙腈进行样品提取，提高兽药残留量检测精度
对动物性食品进行兽药残留检测，可以保障动物饲料的健康性，在采用高效液相色谱进行饲料中兽药残留检测的过程中，如果仅是采用单一药品样品检测，那么可能无法提取饲料样品中的兽药残留量，但是对样品采用酸化乙腈进行直接提取，在交提取后的样品采用甲酸溶液进行稀释，这样便可以形成以甲酸溶液和乙腈体系为主的梯度洗脱，在对兽药残留药进行检测中，利用C18色谱柱便可以精准的检测出动物饲料中的兽药残留量，采用这一方法便可以对动物饲料中的苯比咪唑类药物浓度进行监测，通常监测范围在0.02～10.0mg/L，此外在这一范围内可以形成良好的线性监测数据。在对样品进行检测完毕后，再通过采用三氯甲烷提取一定的溶液，采用SPE小柱进行深度净化，就可以再次形成外标法定量，采用这一方法对饲料中的兽药残留量回收率较高，且定量限定额可达到0.05mg/L。
2.利用液相色谱-串联质谱法，提高畜产品兽药残留量测定精度
在对畜产品中的兽药残留量进行检测的过程中，可采用液相色谱-串联质谱法进行检测，该方法可以对畜产品中的喹诺酮类药物进行精准检测，通常采用串联质谱法可以对动物源性食品中弗罗沙星、依诺沙星、诺氟沙星、斯帕沙星等7种喹诺酮类药物进行检测。在检测过程中依然可以采用乙腈溶液进行提取，将提取后的溶液通过正乙烷溶液进行离析脱脂，在采用小柱净化对强阳离子进行固相萃取，这样便可以对1.0～100ug/L的喹诺酮类药物进行检测，在对动物源性食品中的兽药残留量进行回收率检查的过程中，发现动物源性食品中的兽药残留量回收率可达到93%，在对兽药残留进行精准检测的过程中，还可以通过串联质谱法与正离子检测法相配合的形式，对不同类型的氨基酸缩合而成的小分子肽类兽药成分进行监测，但是在这一过程中需要采用浓度在4%的三氯乙酸乙腈溶液对蛋白进行除去，再采用浓度在1%的甲酸和1%的甲酸乙腈进行混合，这样便可以的畜产品中的多肽类抗生素进行提取，且提取回收率在75%左右。
3.利用甲醇-乙酸乙酯，提高畜禽尿液兽药检测精度
在对畜禽尿液中的兽药进行检测的过程中，可以采用乙醇-乙酸乙酯进行检测，通过这一方法便可以对畜禽尿液中十余种镇静剂内药物进行检测，其主要步骤是采用浓度在1%的甲酸溶液与乙腈溶液进行混合，然后通过色谱柱对样品进行分离，进而采用电喷雾正电子模式对样品進行电离，再通过基质校准对畜禽尿液中的兽药残留量进行定量分析。同时在检测过程中可以采用LC-MS/MS的数据谱图受仪器在全扫描模式下进行兽药残留量检测，但是在检测中不同仪器条件（如碰撞能、碰撞气体流量等）给出的化合物高效液相色谱图会有很大差异，这就需要检测人员对检测仪器进行精准调节。
三、结束语
高效液相色谱技术在科学研究中可以作为一种高效分离、定性、定量的离子检测技术，对饲料、食品、尿液中的兽药残留量具有着显著的检测优势。同时在采用该技术的过程中，对样品的处理工艺较为简单，可以在同一步骤中对样品中的多种药物成分进行残留检测，并不需要对药品进行衍生化反应，这样便可以显著提高样品的检测精度。
在科研院所和大型质检机构可以应用所以高效液相色谱技术，是因为高效液相色谱技术在对残留兽药进行前扫描测定的过程中，可以采用标准物质校准方法对残留兽药中的化合物结构进行离子分析，进一步提高我国现有高效液相色谱技术的检测精度。
参考文献
[1]徐伟，耿士伟，刘路，etal.高效液相色谱—串联质谱法同时检测猪肉中125种兽药残留[J].天津农业科学，2020（2）.
[2]陈兴连，林涛，刘兴勇，etal.超高效液相色谱-串联质谱法快速测定鱼和虾中多类禁，限用兽药残留[J].色谱，2020（5）：538-546.
[3]黄梅花.QuEChERS结合液相色谱串联质谱法同时测定鸡蛋中氟虫腈与氯霉素等7种农兽药残留[J].食品安全质量检测学报，2020，011（006）：1821-1826.
[4]付体鹏，张峰，刘力，etal.高效液相色谱-电喷雾-iFunnel-串联质谱法同时测定猪尿液中20种禁用兽药残留[J].分析测试学报，2019，032（010）：1153-1159.
（武汉海关技术中心 湖北 武汉 430000）