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猪源戊型肝炎病毒基因IV型ORF3编码蛋白的表达及鉴定

来源 :中国生物工程杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户：chenbenxia

【摘 要】

：

通过PCR从已构建的猪源戊型肝炎病毒全基因克隆扩增ORF3全基因,将扩增产物插入到pMD18-T载体中,亚克隆至原核表达载体pET28a（＋）,构建pET28a-ORF3表达载体,转入E.coliBL21（DE3）,IPT

【作 者】

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屈勇刚 贾鹏 金宁一 陆民 孙中锋 朱光泽 于芳 刘玉生 夏 

【机 构】

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吉林大学畜牧兽医学院,军事医学科学院军事兽医研究所,石河子大学动物科技学院,长春中医药大学第一临床附属医院

【出 处】

：

中国生物工程杂志

【发表日期】

：

2008年1期

【关键词】

：

戊型肝炎病毒 结构蛋白 原核表达 Hepatitis E virus Open reading frame 3 （ORF3） Prokaryotic expre 

【基金项目】

：

国家“973”计划资助项目（2005CB523005）,国家自然科学基金资助项目（30771609）

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通过PCR从已构建的猪源戊型肝炎病毒全基因克隆扩增ORF3全基因,将扩增产物插入到pMD18-T载体中,亚克隆至原核表达载体pET28a（＋）,构建pET28a-ORF3表达载体,转入E.coliBL21（DE3）,IPTG诱导表达。Ni-NTA层析柱纯化表达蛋白,用SDS-PAGE、免疫印迹、ELISA等方法分析鉴定表达产物。结果成功扩增到345bp的目的基因;构建了重组表达载体pET28a-ORF3;转化宿主菌E.coliBL21（DE3）后表达产物的相对分子质量在6.50～16.5kDa之间,与预期

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