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摘要：目的：HPLC法测定甲亢合剂中的阿魏酸、黄芩苷含量。方法：采用高效液相色谱法测定甲亢合剂中的阿魏酸、黄芩苷，色谱柱：大连依利特HypersilODS2（150 mm×46 mm，5μm），流动相分别为乙腈-0085%磷酸溶液（17：83）、甲醇-水-磷酸（47：53：02）；流速：1 mL/min；检测波长：316nm、278nm；柱温：35℃结果：阿魏酸、黄芩苷分别在0068μg～0272μg（r=09999）、0345μg～1380μg（r=09999）范围内呈现良好线性关系，阿魏酸的平均回收率为9802%，RSD=103 %；黄芩苷的平均回收率为9849%，RSD=082%。结论：本方法简便，准确，重现性好，可供本品质量控制。
关键词：甲亢合剂；阿魏酸；黄芩苷含量
中图分类号：R2842
文献标识码：A
文章编号：1007-2349（2013）07-0060-03
甲亢合剂由生石膏、麦冬、花粉、石斛、当归、生地、白芍、川芎、黄连、黄芩、乌梅、石莲肉、夏枯草等13味中药组成，具有养阴血、清胃火之作用，对治疗甲亢等疗效显著。为控制该制剂的质量，保证临床用药安全有效，通过实验研究及文献调阅，采用以当归、川芎中阿魏酸和黄芩中黄芩苷作为定量测定的指标成份，并建立定量测定方法，所建立的方法能客观反映甲亢合剂的品质，对其质量进行有效控制。
1 仪器、试剂与样品
11 仪器 LC-10AT高效液相色谱仪（岛津公司），SPD-10Avp紫外检测器，CLASS-VP色谱工作站。Meter AE240电子天平。
12 试药 硅胶 G，青岛海洋化工厂，甲醇、乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。阿魏酸对照品（批号：110773-200611）、黄芩苷对照品（批号：0715-200212）。甲亢合剂为本院生产，批号：120812、120819、120901。
2 方法与结果
21 阿魏酸的含量测定[1]
211 对照品的制备 精密称取阿魏酸对照品适量，加甲醇溶解，质量浓度为136 μg/mL，即得。
212 供试品溶液的制备 精密量取供试品3 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇至定容，用045 μm微孔滤膜过滤，作为供试品溶液。
213 阴性对照溶液的制备 按甲亢合剂处方比例，称取除当归、川芎的其余药味，按照甲亢合剂的制备工艺，制备不含当归、川芎的阴性样品，按212项下方法操作，制成缺当归、川芎的阴性对照溶液。
214 色谱条件 色谱柱为HypersilODSbp（150 mm×46 mm，5 μm，大连依利特公司）；流动相为乙腈-0085%磷酸（17：83）；流速为 1 mL/min；柱温35 ℃；检测波长316 nm；理论塔板数按阿魏酸计算应不低于5000。
215 线性关系考察 取阿魏酸对照品（136 μg/mL）溶液5，10，12，15，20μL，按上述阿魏酸色谱条件进样测定，以峰面积为纵坐标，阿魏酸进样量为横坐标，得线性回归方程：Y=5906519746X+77287859，r=09999（n=5），结果表明阿魏酸进样量在0068μg～0272μg 范围内与峰面积线性关系良好。
216 精密度试验 精密吸取同一对照品溶液（质量浓度为136 μg/mL）10 μL，相同条件下重复进样5次，求得阿魏酸平均峰面积为803332（RSD=065%）。
217 重复性试验 取同一批号供试品6份，按照正文定量测定方法操作并测定，其平均含量为0268mg/mL（RSD=154%），表明方法重复性好。
218 空白试验 取阴性样品溶液10 μL，按214项下进行测定，结果缺当归、川芎的阴性样品溶液在阿魏酸对照品色谱峰相同保留时间处未显色谱峰，表明：阴性样品没有干扰（见图1）。
219 稳定性试验 精密吸取重复性试验样品，照上述色谱条件进样10 μL，分别在0，2，4，6，12，24h 测定，共进样6次，记录峰面积，结果表明阿魏酸峰面积计算，RSD=043 %，表明供试品溶液在在室温下放置24 h内基本稳定。
2110 回收率试验 精密量取已知阿魏酸含量的同一批号供试品6份，加入一定量阿魏酸对照品，按212项下方法制备，依法测定，计算回收率，结果见表1
2111 样品测定 取3批样品，按212项下供试品制备方法制备，按上述色谱条件测定峰面积，按外标法计算含量，结果见表2，色谱图见图1。
A、供试品；B、对照品；C、缺当归、川芎对照品；1、阿魏酸
22 黄芩苷的含量测定[1]
221 对照品的制备 取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇超声溶解并稀释至刻度，摇匀，配制成质量浓度为69 μg/mL的对照品溶液。
222 供试品溶液的制备 精密量取供试品1 mL，置10 mL量瓶中，用甲醇定容，用045 μm微孔滤膜滤过，作为供试品溶液。
223 阴性对照溶液的制备 按甲亢处方比例称取除黄芩的其余药味，按照甲亢合剂的制备工艺，制备不含黄芩的阴性样品，按222项下方法操作，制成缺黄芩的阴性对照溶液。
224 色谱条件 色谱柱为HypersilODSbp（150 mm×46 mm，5μm，大连依利特公司）；流动相为甲醇-水-磷酸溶液（47：53：02）；流速为 1 mL·min-1；柱温为35 ℃；检测波长为278 nm；理论塔板数按芍药苷计算应不低于3000。
225 线性关系考察 精密吸取黄芩苷对照品（69 μg/mL）溶液5，10，12，15，20 μL，按234色谱条件测定，以峰面积为纵坐标，黄芩苷质量浓度为横坐标，进行线性回归，计算得回归方程Y=3577836019X+9705102236，r=09999，结果表明黄芩苷进样量在0345μg～1380 μg 范围内与峰面积的线性关系良好。
226 精密度试验 吸取黄芩苷对照品溶液（质量浓度69 μg/mL）10 μL，相同条件下重复进样5次，求得黄芩苷平均峰面积为2478787（RSD=056%），表明仪器精密度良好。
227 重复性试验 精密量取甲亢合剂（批号：120812）6份，按232项下供试品制备方法制备，照上述色谱条件进样10 μL，记录峰面积。经计算黄芩苷平均含量为 712 mg/mL（RSD=112%）。
228 空白试验 取阴性样品溶液10μl，按224项下进行测定，结果缺黄芩的阴性样品溶液在黄芩苷对照品色谱峰相同保留时间处未显色谱峰，表明：阴性样品没有干扰（见图2）。
229 稳定性试验 精密吸取重复性试验样品，照上述色谱条件进样10 μL，分别在0，2，4，6，12，24 h 测定，记录峰面积，结果表明黄芩苷平均峰面积的RSD=078%，表明供试品溶液在在室温下放置24 h基本稳定。
2210 回收率试验 精密量取已知黄芩苷含量的同一批号供试品6份，加入一定量黄芩苷对照品，按222制备方法制备供试品溶液，依法测定，计算回收率，结果见表3。
2211 样品测定 取3批样品，按222项下供试品制备方法制备，按上述色谱条件测定峰面积，按外标法计算含量，结果见表4，色谱图见图2。
3 讨论
阿魏酸的含量测定试验参考文献[1]项下采用流动相甲醇-0085%磷酸（13∶87），流动相甲醇-01%磷酸（30∶70），结果阿魏酸采用流动相乙腈-05%醋酸（17∶83）可以基线分离不受其他组分干扰，分离效果好，准确度高。黄芩苷的含量测定试验采用流动相甲醇-冰醋酸-水（50∶1∶50），流动相乙腈-水-磷酸（20∶80∶01），流动相甲醇-水-磷酸（47∶53∶02），结果甲醇-水-磷酸（47∶53∶02）流动相分离效果好，准确度高。
参考文献：
[1]国家药典委员会中华人民共和国药典[S]（一部）北京：中国医药科技出版社，2010：510～1212
关键词：甲亢合剂；阿魏酸；黄芩苷含量
中图分类号：R2842
文献标识码：A
文章编号：1007-2349（2013）07-0060-03
甲亢合剂由生石膏、麦冬、花粉、石斛、当归、生地、白芍、川芎、黄连、黄芩、乌梅、石莲肉、夏枯草等13味中药组成，具有养阴血、清胃火之作用，对治疗甲亢等疗效显著。为控制该制剂的质量，保证临床用药安全有效，通过实验研究及文献调阅，采用以当归、川芎中阿魏酸和黄芩中黄芩苷作为定量测定的指标成份，并建立定量测定方法，所建立的方法能客观反映甲亢合剂的品质，对其质量进行有效控制。
1 仪器、试剂与样品
11 仪器 LC-10AT高效液相色谱仪（岛津公司），SPD-10Avp紫外检测器，CLASS-VP色谱工作站。Meter AE240电子天平。
12 试药 硅胶 G，青岛海洋化工厂，甲醇、乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。阿魏酸对照品（批号：110773-200611）、黄芩苷对照品（批号：0715-200212）。甲亢合剂为本院生产，批号：120812、120819、120901。
2 方法与结果
21 阿魏酸的含量测定[1]
211 对照品的制备 精密称取阿魏酸对照品适量，加甲醇溶解，质量浓度为136 μg/mL，即得。
212 供试品溶液的制备 精密量取供试品3 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇至定容，用045 μm微孔滤膜过滤，作为供试品溶液。
213 阴性对照溶液的制备 按甲亢合剂处方比例，称取除当归、川芎的其余药味，按照甲亢合剂的制备工艺，制备不含当归、川芎的阴性样品，按212项下方法操作，制成缺当归、川芎的阴性对照溶液。
214 色谱条件 色谱柱为HypersilODSbp（150 mm×46 mm，5 μm，大连依利特公司）；流动相为乙腈-0085%磷酸（17：83）；流速为 1 mL/min；柱温35 ℃；检测波长316 nm；理论塔板数按阿魏酸计算应不低于5000。
215 线性关系考察 取阿魏酸对照品（136 μg/mL）溶液5，10，12，15，20μL，按上述阿魏酸色谱条件进样测定，以峰面积为纵坐标，阿魏酸进样量为横坐标，得线性回归方程：Y=5906519746X+77287859，r=09999（n=5），结果表明阿魏酸进样量在0068μg～0272μg 范围内与峰面积线性关系良好。
216 精密度试验 精密吸取同一对照品溶液（质量浓度为136 μg/mL）10 μL，相同条件下重复进样5次，求得阿魏酸平均峰面积为803332（RSD=065%）。
217 重复性试验 取同一批号供试品6份，按照正文定量测定方法操作并测定，其平均含量为0268mg/mL（RSD=154%），表明方法重复性好。
218 空白试验 取阴性样品溶液10 μL，按214项下进行测定，结果缺当归、川芎的阴性样品溶液在阿魏酸对照品色谱峰相同保留时间处未显色谱峰，表明：阴性样品没有干扰（见图1）。
219 稳定性试验 精密吸取重复性试验样品，照上述色谱条件进样10 μL，分别在0，2，4，6，12，24h 测定，共进样6次，记录峰面积，结果表明阿魏酸峰面积计算，RSD=043 %，表明供试品溶液在在室温下放置24 h内基本稳定。
2110 回收率试验 精密量取已知阿魏酸含量的同一批号供试品6份，加入一定量阿魏酸对照品，按212项下方法制备，依法测定，计算回收率，结果见表1
2111 样品测定 取3批样品，按212项下供试品制备方法制备，按上述色谱条件测定峰面积，按外标法计算含量，结果见表2，色谱图见图1。
A、供试品；B、对照品；C、缺当归、川芎对照品；1、阿魏酸
22 黄芩苷的含量测定[1]
221 对照品的制备 取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇超声溶解并稀释至刻度，摇匀，配制成质量浓度为69 μg/mL的对照品溶液。
222 供试品溶液的制备 精密量取供试品1 mL，置10 mL量瓶中，用甲醇定容，用045 μm微孔滤膜滤过，作为供试品溶液。
223 阴性对照溶液的制备 按甲亢处方比例称取除黄芩的其余药味，按照甲亢合剂的制备工艺，制备不含黄芩的阴性样品，按222项下方法操作，制成缺黄芩的阴性对照溶液。
224 色谱条件 色谱柱为HypersilODSbp（150 mm×46 mm，5μm，大连依利特公司）；流动相为甲醇-水-磷酸溶液（47：53：02）；流速为 1 mL·min-1；柱温为35 ℃；检测波长为278 nm；理论塔板数按芍药苷计算应不低于3000。
225 线性关系考察 精密吸取黄芩苷对照品（69 μg/mL）溶液5，10，12，15，20 μL，按234色谱条件测定，以峰面积为纵坐标，黄芩苷质量浓度为横坐标，进行线性回归，计算得回归方程Y=3577836019X+9705102236，r=09999，结果表明黄芩苷进样量在0345μg～1380 μg 范围内与峰面积的线性关系良好。
226 精密度试验 吸取黄芩苷对照品溶液（质量浓度69 μg/mL）10 μL，相同条件下重复进样5次，求得黄芩苷平均峰面积为2478787（RSD=056%），表明仪器精密度良好。
227 重复性试验 精密量取甲亢合剂（批号：120812）6份，按232项下供试品制备方法制备，照上述色谱条件进样10 μL，记录峰面积。经计算黄芩苷平均含量为 712 mg/mL（RSD=112%）。
228 空白试验 取阴性样品溶液10μl，按224项下进行测定，结果缺黄芩的阴性样品溶液在黄芩苷对照品色谱峰相同保留时间处未显色谱峰，表明：阴性样品没有干扰（见图2）。
229 稳定性试验 精密吸取重复性试验样品，照上述色谱条件进样10 μL，分别在0，2，4，6，12，24 h 测定，记录峰面积，结果表明黄芩苷平均峰面积的RSD=078%，表明供试品溶液在在室温下放置24 h基本稳定。
2210 回收率试验 精密量取已知黄芩苷含量的同一批号供试品6份，加入一定量黄芩苷对照品，按222制备方法制备供试品溶液，依法测定，计算回收率，结果见表3。
2211 样品测定 取3批样品，按222项下供试品制备方法制备，按上述色谱条件测定峰面积，按外标法计算含量，结果见表4，色谱图见图2。
3 讨论
阿魏酸的含量测定试验参考文献[1]项下采用流动相甲醇-0085%磷酸（13∶87），流动相甲醇-01%磷酸（30∶70），结果阿魏酸采用流动相乙腈-05%醋酸（17∶83）可以基线分离不受其他组分干扰，分离效果好，准确度高。黄芩苷的含量测定试验采用流动相甲醇-冰醋酸-水（50∶1∶50），流动相乙腈-水-磷酸（20∶80∶01），流动相甲醇-水-磷酸（47∶53∶02），结果甲醇-水-磷酸（47∶53∶02）流动相分离效果好，准确度高。
参考文献：
[1]国家药典委员会中华人民共和国药典[S]（一部）北京：中国医药科技出版社，2010：510～1212