【摘 要】
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目的探讨经宿主体内环境诱导前后赖型钩端螺旋体溶血素致病基因表达的差异。方法以赖型钩端螺旋体56601株的染色体DNA为模板,PCR扩增出溶血素基因片段为探针,并通过VersArray
【机 构】
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四川大学华西基础医学与法医学院感染免疫研究室,
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目的探讨经宿主体内环境诱导前后赖型钩端螺旋体溶血素致病基因表达的差异。方法以赖型钩端螺旋体56601株的染色体DNA为模板,PCR扩增出溶血素基因片段为探针,并通过VersArray Chipwriter系统构建基因芯片。提取感染宿主前后钩端螺旋体RNA,逆转录为cDNA,用随机引物PCR扩增,以HEX和CY5双色荧光标记并与基因芯片进行杂交,使用Genepix 4000B扫描仪扫描芯片,通过检测芯片上的荧光信号比值来研究钩端螺旋体溶血素基因在宿主体内的表达情况。结果成功构建赖型钩端螺旋体56601株溶血素基因芯片,芯片检测发现在宿主感染后钩体溶血素基因LA1029(Ratio=0.65)、LA1027(Ratio=0.53)具有明显上调表达(Ratio<0.67);LA3540(Ratio=1.88)、LA3937(Ratio=5.58)、LA1029(Ratio=3.00)在宿主肝脏中的表达比在血液中有明显增高(Ratio>1.5),而LA4004的表达在宿主肝脏中要明显低于血液中(Ratio=0.67);LA3937(Ratio=2.28)和LA1029(Ratio=2.20)在宿主肾脏中的表达要明显高于血液中(Ratio>1.5)。结论钩体溶血素基因的体内外表达和不同器官间的表达存在差异,这些差异表达的溶血素基因及产物在钩体病的致病中可能起重要的作用。
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