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【摘要】 目的 观察灵芝孢子粉对2型糖尿病大鼠肝脏细胞凋亡及核转录因子NFκB表达的影响。方法 将40只Wistar大鼠随机分成3组:对照组,糖尿病组,灵芝组。吉姆萨染色法检测肝脏细胞凋亡率,免疫组化法检测核因子κB转录(NFκB)蛋白表达的变化。结果 细胞凋亡率和NFκB表达水平均明显高于对照组和灵芝组(P均<0.05)。结论 灵芝孢子粉对糖尿病大鼠肝脏组织具有保护作用,可抑制肝脏细胞凋亡,可能与其减轻氧化应激、减少糖尿病肝脏过度表达NFκB有关。
【关键词】
2型糖尿病;核转录因子(NFκB);细胞凋亡;灵芝孢子
Effect of Ganoderma lucidum powder on liver cell apoptosis and nuclear transcription factor NF-κB/65 expression in type 2 diabetes rat
SUN Tao, XIE Hong. Jiamusi Infectious Disease Hospital, Jiamusi City, Heilongjiang Province 154007, China
【Abstract】 Objective To observe the effect of Ganoderma lucidum powder on liver cell apoptosis and nuclear transcription factor NF-κB/65 expression in type 2 diabetes rat.Methods 40 Wistar big mice were divided into three groups randomly: control group, diabetes group and ganoderma lucidum group. The apoptosis rate of liver cell was detected by Giemsa staining and the expression of nuclear transcription factor NF-κB/65 was detected by immunohistochemical staining. Results The apoptosis rate and the expression of NF-κB/65 in diabetes group was obviously higher than that of control group and ganoderma lucidum group (P<0.05).Conclusion Ganoderma lucidum powder can protect the liver organization of diabetes rats and restraint the liver cell apoptosis rate, which may be the result of reducing the oxidative stress and reducing the NF-κB/65 overexpression of diabetic liver.
【Key words】
Type 2 diabetes mellitus;Nuclear transcription factor(NFκ B);Apoptosis;Ganoderma lucidum
DOI:10.3760/cma.j.issn 16738799.2010.01.33
作者單位:154007黑龙江省佳木斯市传染病医院(孙涛);
天津,武装警察部队医学院生物化学教研室(谢红)
糖尿病肝病的发病机制至今未明,近年来已注意到细胞凋亡在糖尿病慢性并发症发生发展中的作用。由此推测,肝细胞凋亡(apoptosis)可能参与糖尿病肝病的生理及病理过程。本实验研究灵芝孢子粉对2型糖尿病大鼠肝脏细胞凋亡和核转录因子(NFκB)表达的影响,进一步探讨灵芝孢子粉对实验性糖尿病大鼠肝脏功能的影响和作用机制。
1 材料与方法
1.1 药品与试剂 链尿佐菌素(STZ)为北京拜尔迪生物技术有限公司产品;葡萄糖液体试剂盒(潍坊3V生物工程有限公司);灵芝孢子粉为佳木斯灵芝养殖厂产品。
1.2 方法
1.2.1 2型糖尿病大鼠模型的建立及分组 雄性Wistar大鼠40只,随机分为正常组、糖尿病组和灵芝组。模型组及灵芝孢子组大鼠经尾静脉注射2%链脲佐菌素(STZ),正常对照组尾静脉注射等量柠檬酸钠柠檬酸缓冲液。正常饮食喂养2周后,进行糖耐量试验,模型组和灵芝孢子粉组以糖耐量异常者保留,余去除。模型组改喂高脂高糖饮食,灵芝组另加灵芝孢子粉(250 mg/kg•d)持续10周。实验结束前一天做血糖试验。
1.2.2 血清葡萄糖浓度的测定 应用血糖试纸进行检测第一周及第十二周大鼠尾静脉血糖值。
1.2.3 NFκB蛋白表达测定 采用免疫组织化学SP法检测。NFκB/P65表达结果判定:光镜下,显示有棕黄色颗粒者为NFκB/P65阳性细胞。
1.2.4 凋亡率测定(吉姆萨染色法) 镜下观察,凋亡细胞为深兰色。
1.2.5 统计学方法 所有数据以均数士标准差(x±s)表示,阳性率的比较采用SPSS l1.5软件进行检验。以P<0.05为有显著性差异。
2 结果
2.1 血糖变化
实验开始,糖尿病组及灵芝组大鼠血糖升高(P<0.05),实验12周糖尿病组血糖显著升高(P<0.05),灵芝组血糖降低(P>0.05)。(见表1)。
表1
实验开始前及实验12周各组大鼠血糖水平(mmo1/L,x±s)
项目正常组糖尿病组灵芝组
实验开始3.793±0.69818.423±2.49618.572±4.329
实验12周3.875±0.7238.631±2.54818.239±4.638
2.2 NFκB蛋白表达的变化及肝脏组织细胞凋亡率的变化 NFκB是重要的核转录因子,以细胞核棕染色为阳性。模型组与正常组、灵芝孢子粉组相比差异有显著性(P<0.05),而灵芝孢子粉组与正常组比较差异无显著性(P>0.05),镜下显示背景淡兰色,核为深兰色,凋亡细胞为深兰色。肝脏组织细胞凋亡率变化,模型组明显升高(P<0.05)。而灵芝孢子粉组与正常组比较差异无显著性(P>0.05)(见表2)。
表2
NFκB蛋白表达的变化及肝脏组织细胞凋亡率的变化
组别凋亡率NFκB表达
正常组14.37%16.216%
糖尿病组17.684%17.625%
灵芝组42.54%46.657%
3 讨论
NFκB是一类蛋白质,广泛存在于胞浆及胞质中,是调节免疫反应、应激反应、凋亡和炎症的中心环节,可被多种不同刺激激活,参与多种基因,尤其是与机体防御功能有关的即早基因的表达及调控。NFκB激活后进入细胞核调节多种生长因子、趋化因子、黏附分子、细胞因子的表达,即依赖NFκB激活的基因转录和与核DNA的结合增加,诱导肝脏细胞发生凋亡。本研究中灵芝孢子粉处理后糖尿病大鼠肝脏组织中NFκB表达明显低于对照组,因而推测具有减少糖尿病发生后NFκB过度表达作用,从而减轻肝脏细胞凋亡的发生,降低肝脏的病理损害。
综上所述,灵芝孢子粉具有抗癌作用、抗炎作用和清除自由基作用等功能[1]。灵芝孢子粉能减少糖尿病所致的肝脏细胞凋亡,其机制可能与其抗自由基损伤、减少肝脏组织过度表达NFκB有关,其具体的分子机制或信号传导途径尚需进一步研究。
参考文献
[1] 刘虹,周甄鸿,刘志宏.灵芝孢子粉药理作用研究进展.天津中医学院学报,2002,21(4):5051.
【关键词】
2型糖尿病;核转录因子(NFκB);细胞凋亡;灵芝孢子
Effect of Ganoderma lucidum powder on liver cell apoptosis and nuclear transcription factor NF-κB/65 expression in type 2 diabetes rat
SUN Tao, XIE Hong. Jiamusi Infectious Disease Hospital, Jiamusi City, Heilongjiang Province 154007, China
【Abstract】 Objective To observe the effect of Ganoderma lucidum powder on liver cell apoptosis and nuclear transcription factor NF-κB/65 expression in type 2 diabetes rat.Methods 40 Wistar big mice were divided into three groups randomly: control group, diabetes group and ganoderma lucidum group. The apoptosis rate of liver cell was detected by Giemsa staining and the expression of nuclear transcription factor NF-κB/65 was detected by immunohistochemical staining. Results The apoptosis rate and the expression of NF-κB/65 in diabetes group was obviously higher than that of control group and ganoderma lucidum group (P<0.05).Conclusion Ganoderma lucidum powder can protect the liver organization of diabetes rats and restraint the liver cell apoptosis rate, which may be the result of reducing the oxidative stress and reducing the NF-κB/65 overexpression of diabetic liver.
【Key words】
Type 2 diabetes mellitus;Nuclear transcription factor(NFκ B);Apoptosis;Ganoderma lucidum
DOI:10.3760/cma.j.issn 16738799.2010.01.33
作者單位:154007黑龙江省佳木斯市传染病医院(孙涛);
天津,武装警察部队医学院生物化学教研室(谢红)
糖尿病肝病的发病机制至今未明,近年来已注意到细胞凋亡在糖尿病慢性并发症发生发展中的作用。由此推测,肝细胞凋亡(apoptosis)可能参与糖尿病肝病的生理及病理过程。本实验研究灵芝孢子粉对2型糖尿病大鼠肝脏细胞凋亡和核转录因子(NFκB)表达的影响,进一步探讨灵芝孢子粉对实验性糖尿病大鼠肝脏功能的影响和作用机制。
1 材料与方法
1.1 药品与试剂 链尿佐菌素(STZ)为北京拜尔迪生物技术有限公司产品;葡萄糖液体试剂盒(潍坊3V生物工程有限公司);灵芝孢子粉为佳木斯灵芝养殖厂产品。
1.2 方法
1.2.1 2型糖尿病大鼠模型的建立及分组 雄性Wistar大鼠40只,随机分为正常组、糖尿病组和灵芝组。模型组及灵芝孢子组大鼠经尾静脉注射2%链脲佐菌素(STZ),正常对照组尾静脉注射等量柠檬酸钠柠檬酸缓冲液。正常饮食喂养2周后,进行糖耐量试验,模型组和灵芝孢子粉组以糖耐量异常者保留,余去除。模型组改喂高脂高糖饮食,灵芝组另加灵芝孢子粉(250 mg/kg•d)持续10周。实验结束前一天做血糖试验。
1.2.2 血清葡萄糖浓度的测定 应用血糖试纸进行检测第一周及第十二周大鼠尾静脉血糖值。
1.2.3 NFκB蛋白表达测定 采用免疫组织化学SP法检测。NFκB/P65表达结果判定:光镜下,显示有棕黄色颗粒者为NFκB/P65阳性细胞。
1.2.4 凋亡率测定(吉姆萨染色法) 镜下观察,凋亡细胞为深兰色。
1.2.5 统计学方法 所有数据以均数士标准差(x±s)表示,阳性率的比较采用SPSS l1.5软件进行检验。以P<0.05为有显著性差异。
2 结果
2.1 血糖变化
实验开始,糖尿病组及灵芝组大鼠血糖升高(P<0.05),实验12周糖尿病组血糖显著升高(P<0.05),灵芝组血糖降低(P>0.05)。(见表1)。
表1
实验开始前及实验12周各组大鼠血糖水平(mmo1/L,x±s)
项目正常组糖尿病组灵芝组
实验开始3.793±0.69818.423±2.49618.572±4.329
实验12周3.875±0.7238.631±2.54818.239±4.638
2.2 NFκB蛋白表达的变化及肝脏组织细胞凋亡率的变化 NFκB是重要的核转录因子,以细胞核棕染色为阳性。模型组与正常组、灵芝孢子粉组相比差异有显著性(P<0.05),而灵芝孢子粉组与正常组比较差异无显著性(P>0.05),镜下显示背景淡兰色,核为深兰色,凋亡细胞为深兰色。肝脏组织细胞凋亡率变化,模型组明显升高(P<0.05)。而灵芝孢子粉组与正常组比较差异无显著性(P>0.05)(见表2)。
表2
NFκB蛋白表达的变化及肝脏组织细胞凋亡率的变化
组别凋亡率NFκB表达
正常组14.37%16.216%
糖尿病组17.684%17.625%
灵芝组42.54%46.657%
3 讨论
NFκB是一类蛋白质,广泛存在于胞浆及胞质中,是调节免疫反应、应激反应、凋亡和炎症的中心环节,可被多种不同刺激激活,参与多种基因,尤其是与机体防御功能有关的即早基因的表达及调控。NFκB激活后进入细胞核调节多种生长因子、趋化因子、黏附分子、细胞因子的表达,即依赖NFκB激活的基因转录和与核DNA的结合增加,诱导肝脏细胞发生凋亡。本研究中灵芝孢子粉处理后糖尿病大鼠肝脏组织中NFκB表达明显低于对照组,因而推测具有减少糖尿病发生后NFκB过度表达作用,从而减轻肝脏细胞凋亡的发生,降低肝脏的病理损害。
综上所述,灵芝孢子粉具有抗癌作用、抗炎作用和清除自由基作用等功能[1]。灵芝孢子粉能减少糖尿病所致的肝脏细胞凋亡,其机制可能与其抗自由基损伤、减少肝脏组织过度表达NFκB有关,其具体的分子机制或信号传导途径尚需进一步研究。
参考文献
[1] 刘虹,周甄鸿,刘志宏.灵芝孢子粉药理作用研究进展.天津中医学院学报,2002,21(4):5051.