【摘 要】
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家蚕微粒子病病原为桑蚕微孢子虫(Nosema bombycis Nageli, N.b).本文根据文献报道,选用了一对根据N.b孢子及其相近种属微孢子虫的SSU-rRNA保守区段设计的有效引物VIF/530R,
【机 构】
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华南农业大学蚕学分子生物学与生物技术实验室,Leeds大学生物学院
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家蚕微粒子病病原为桑蚕微孢子虫(Nosema bombycis Nageli, N.b).本文根据文献报道,选用了一对根据N.b孢子及其相近种属微孢子虫的SSU-rRNA保守区段设计的有效引物VIF/530R,从模拟感染不同浓度N.b孢子(3×101-7/ml)的蚕蛾、蚕卵的角度,较系统地研究了PCR诊断技术的可检测灵敏度和对模拟感染家蚕微粒子病的诊断效果,为PCR分子诊断家蚕微粒子病的实用化研究提供参考.在本实验的DNA制备方法和PCR反应条件下,分别对由不同浓度N.b纯孢子抽提的DNA模板和不同浓度N.b纯孢子(3×101～7·ml-1)分别与蚕卵、蚕蛾混合抽提的DNA模板进行PCR扩增检测.结果表明:(1)对N.b纯孢子DNA模板,PCR可检测灵敏度为3×104N.b·ml-1(弱检测信号可到3×102～3N.b·ml-1),对模拟染毒N.b孢子的蚕蛾DNA模板,PCR可检测灵敏度为3×105N.b·ml-1,两者分别已超过或达到目前生产上用显微镜的检毒水平;(2)对模拟染毒N.b孢子的蚕卵DNA模板,VIF/530R引物不能有效地检出蚕卵中染毒的N.b孢子DNA信号,推测在蚕卵DNA抽提物里可能含有抑制PCR扩增的未明因素,而蚕蛾DNA抽提物里则无此抑制因素.
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