【摘 要】
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目的 探讨白纹伊蚊唾液rAlb-34k2蛋白在DENV2感染C6/36细胞中的作用. 方法 采用RT-qPCR检测不同浓度rAlb-34k2蛋白作用6h、60 h后C6/36细胞内DENV2 NS1核酸的变化;采用Dot-EL
【机 构】
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贵州医科大学基础医学院免疫学教研室,贵州贵阳550025;贵州医科大学基础医学院寄生虫学教研室;贵州医科大学基础医学院寄生虫学教研室;贵州医科大学现代病原生物学特色重点实验室
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目的 探讨白纹伊蚊唾液rAlb-34k2蛋白在DENV2感染C6/36细胞中的作用. 方法 采用RT-qPCR检测不同浓度rAlb-34k2蛋白作用6h、60 h后C6/36细胞内DENV2 NS1核酸的变化;采用Dot-ELISA检测rAlb-34k2蛋白与DENV2颗粒结合情况;采用ELISA及Western blot分别检测rAlb-34k2蛋白与C6/36细胞膜蛋白结合的差异.结果 rAlb-34k2蛋白作用6h后,C6/36细胞内DENV2 NS1 RNA的相对表达被抑制,其中10、25、100 μg/ml浓度组NS1 RNA的相对表达(2-△△CT)值分别为(0.6778±0.04827)、(0.5972±0.06369)和(0.4704±0.05297),差异有统计学意义(P＜0.05);rAlb-34k2蛋白作用60 h后,各蛋白组间差异无统计学意义.Dot-ELISA检测rAlb-34k2蛋白(71、118.3、177.5 μg/ml)可与DENV2病毒颗粒结合.间接ELISA检测rAlb-34k2蛋白与C6/36细胞疏水性膜蛋白和亲水性膜蛋白结合的A值分别为(1.1±0.26)和(3.1±0.047),差异有统计学意义(P=0.0016),Western blot检测亲水性膜蛋白的阳性结合条带数显著多于疏水性膜蛋白. 结论 白纹伊蚊雌蚊唾液特异性rAlb-34k2蛋白体外能与DENV2病毒颗粒及C6/36细胞膜蛋白结合,并抑制DENV2病毒早期在C6/36细胞中增殖.
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