论文部分内容阅读
目的研究肌醇需求激酶1(IRE1)抑制剂对染矽尘大鼠肺纤维化内质网应激(ERS)凋亡途径的影响,评价IRE1抑制剂对大鼠矽肺纤维化的干预作用。方法无特定病原体(SPF)级健康成年雄性SD大鼠24只随机分为对照组、矽肺组和IRE1组,每组8只。矽肺组和IRE1组大鼠均采用非气管暴露法一次性注入质量浓度为50.0 g/L的二氧化硅混悬液1.0mL造模,对照组注入等体积灭菌生理氯化钠溶液。造模28 d后,IRE1组大鼠腹腔注射剂量为1.0 mg/kg体质量的IRE1抑制剂,其余2组予等体积灭菌生理氯化钠溶液,每7天注射1次,共4次。造模后第56天处死大鼠,收集左侧肺泡灌洗液,分离、纯化和培养肺泡巨噬细胞(AM)。观察肺组织病理变化情况,实时荧光定量聚合酶链式反应测定肺组织Ⅰ型和Ⅲ型前胶原mRNA相对表达水平,流式细胞术检测AM活性氧(ROS)阳性率和线粒体去极化率,免疫印迹法测定肺组织内IRE1α、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-12、B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的相对表达水平。结果肺组织病理学检查结果显示,矽肺组肺组织可见炎细胞浸润和典型矽结节形成;IRE1组可见普遍炎细胞浸润和肺泡间隔变大,有弥漫性纤维化改变,但未见矽结节形成。IRE1组、矽肺组大鼠肺组织Ⅰ型、Ⅲ型前胶原mRNA相对表达水平和AM的ROS阳性率、线粒体去极化率均高于对照组(P<0.01),IRE1组上述4个指标均低于矽肺组(P<0.01)。IRE1组、矽肺组大鼠肺组织IRE1α、Caspase-12和Bax蛋白的相对表达水平均高于对照组(P<0.01),IRE1组大鼠上述3个指标均低于矽肺组(P<0.01);但IRE1组和矽肺组大鼠肺组织Bcl-2相对表达水平均低于对照组(P<0.01),IRE1组大鼠Bcl-2相对表达水平高于矽肺组(P<0.01)。结论 IRE1参与的ERS凋亡通路可能在矽肺肺纤维化的发生和发展中发挥着重要作用;IRE1抑制剂可以通过阻断IRE1通路拮抗ERS诱导的AM凋亡,从而拮抗肺纤维化。